人类巨细胞病毒感染对脐血造血祖细胞增殖的影响(英文)

目的：探讨人类巨细胞病毒(HCMV)感染对脐血造血祖细胞(CFU-GM、CFU-E、BFU-E、CFU-Mix及CFU-Mk)体外增殖的抑制作用及其机制。方法：20例脐血标本收集于正常足月顺产新生儿。实验共分5组:(1)3个HCMV感染组,每个感染组分别加入0.1 mL的103、104及105空斑形成单位(PFU)HCMV-AD169病毒液于培养体系中;(2)灭活对照组,加入同体积灭活HCMV病毒液;(3)空白对照组,不加HCMV病毒液,代之以同体积的IMDM。采用造血祖细胞体外半固体培养技术,培养、观察、计数HCMV-AD169株对脐血CFU-GM、CFU-E、BFU-E、CFU-Mix及CFU-Mk集落数、抑制率和集落维持时间;并用聚合酶链反应(PCR)技术检测集落细胞内HCMV-DNA。结果：(1)在造血祖细胞培养体系中加入不同滴度的HCMV-AD169后,104和105PFU滴度感染对CFU-GM、CFU-E、BFU-E、CFU-Mix及CFU-Mk集落形成均有显著的抑制作用,103PFU滴度感染对CFU-Mix及CFU-Mk集落形成有显著的抑制作用,与空白对照组和灭活对照组比较,差异有显著性(P<0.05)。病毒滴度越高,抑制程度越明显(P<0.05)。(2)104和105PFU滴度感染组CFU-GM、CFU-E、BFU-E、CFU-Mix及CFU-Mk集落维持时间较对照组明显缩短(P<0.01),103PFU滴度感染组CFU-Mix和CFU-Mk集落维持时间较对照组明显缩短(P<0.01)。(3)PCR显示3个感染组的CFU-GM、CFU-E、CFU-Mix及CFU-Mk集落细胞内均有HCMV-AD169DNA存在。结论：HCMV-AD169能直接感染CFU-GM、CFU-E、BFU-E、CFU-Mix及CFU-Mk造血祖细胞,并抑制造血祖细胞的增殖,这可能与HCMV感染患儿出现粒细胞减少、血小板减少和贫血等造血功能紊乱有关。     

人巨细胞病毒感染对脐血巨核系祖细胞体外增殖的影响

目的　探讨人巨细胞病毒 (HCMV)对脐血巨核系祖细胞 (CFU Mk)体外增殖的影响及其机制。方法　采用造血祖细胞体外培养技术 ,观察、计数HCMV AD169感染的CFU Mk集落产率、抑制率、集落峰值及维持时间 ;并采用聚合酶链反应 (PCR)技术检测集落细胞内HCMV AD169DNA。结果　 1.HCMV AD169感染组集落产率较对照组明显减少 ,HCMV对CFU Mk集落的抑制程度与病毒滴度有关 ,集落产率随病毒感染滴度增高而减少 ,抑制率随病毒感染滴度增高而渐增加 ;各组集落峰值出现时间无明显差异 (P均 >0 .0 5 ) ,但各感染组集落维持时间明显短于对照组 (P <0 .0 1) ;2 .用PCR在集落细胞内检测到HCMV AD169DNA。结论　CFU Mk是HCMV的宿主细胞之一 ,HCMV能直接感染CFU Mk ;在体外HCMV AD169对CFU Mk的增殖和集落形成有明显抑制作用 ,此作用可能与临床HCMV感染后患者血小板减少有关     

巨细胞病毒抑制多向祖细胞的增殖及干预研究

目的　在体外已证实人巨细胞病毒 (HCMV)能抑制骨髓造血祖细胞的增殖。该研究观察HCMV对脐血多向造血祖细胞 (CFU Mix)体外增殖的影响及黄芪和更昔洛韦 (GCV)对此的干预作用。方法　采用造血祖细胞体外培养技术 ,观察HCMV AD1 69感染的CFU Mix集落数、抑制率、提高率、集落峰值及集落维持时间 ;用聚合酶链反应 (PCR)技术检测集落细胞内HCMV AD1 69DNA。在 1∶1 0HCMV感染组中分别加入黄芪和 /或GCV ,观察黄芪和GCV干预HCMV AD1 69对CFU Mix增殖的抑制作用。结果　① 1∶1 0 ,1∶1 0 0 ,1∶1 0 0 0三种滴度HCMV AD1 69感染的CFU Mix集落数较对照组明显减少 (P <0 .0 5 ) ,集落数随病毒感染滴度的增高而减少 ,抑制率随病毒感染滴度的增高而逐渐增加 ;②各组集落峰值出现时间无明显差异 (P >0 .0 5 ) ,但感染组集落维持时间明显短于对照组 (P <0 .0 1 ) ;③ 1∶1 0 ,1∶1 0 0 ,1∶1 0 0 0病毒感染组中检测到HCMV AD1 69DNA ;④ 1∶1 0感染组中加入黄芪和 /或GCV后 ,HCMV AD1 69感染的CFU Mix集落数明显高于未加药 1∶1 0感染组 (P <0 .0 5 )。结论　CFU Mix是HCMV的宿主细胞之一 ,HCMV能直接感染造血祖细胞 ;在体外HCMV AD1 69对CFU Mix生长和集落形成有明显抑制作用 ;黄芪和GCV有明显的抗HCMV作用 ,二者联     

人巨细胞病毒抑制粒-单及红系祖细胞的体外增殖及干预研究

探讨人巨细胞病毒 (HCMV)抑制脐血粒 -单系祖细胞的 (CFU GM)、红系爆式祖细胞 (BFU E)及红系祖细胞 (CFU E)的体外增殖和黄芪注射液与更昔洛韦(GCV)对此的干预作用 ,采用造血祖细胞体外培养、聚合酶链反应 (PCR)技术 ,培养、观察、计数CFU GM、BFU E及CFU E集落产率、抑制率、提高率 ,集落峰值时间和集落维持时间 ,并用PCR检测集落细胞内HCMV DNA。结果显示 :①HCMVAD169对CFU GM、BFU E及CFU E均有抑制作用 ,其抑制作用与HCMV浓度有关 ,高浓度 ( 1∶1 0 ,1 1 0 0 )感染组与对照组比较集落产率明显下降 (P <0 0 1 ) ,集落维持的时间明显缩短 (P <0 0 1 ) ,集落峰值时间无明显差异 (P >0 0 5) ,而低浓度组 ( 1∶1 0 0 0 )无此作用 ;②PCR检测发现在HCMV感染的造血祖细胞内存在HCMV DNA ;③在 1∶1 0感染组中 ,加入黄芪注射液与更昔洛韦后 ,HCMVAD169感染的CFU GM、BFU E及CFU E集落产率明显增加 (P <0 0 1 )。结论 :①造血祖细胞是HCMVAD169的宿主细胞之一 ,HCMVAD169能直接感染造血祖细胞 ;②在体外HCMVAD169对CFU GM、BFU E、CFU E的生长 ,集落形成有明显的抑制作用 ;③黄芪与更昔洛韦有抗HCMV作用 ,能促进受HCMV感染的造血祖细胞集落增殖     

经人类巨细胞病毒感染的人脐血造血干细胞向淋巴系造血祖细胞增殖分化过程中同源盒b4、b6基因的表达

目的 探讨经人类巨细胞病毒(HCMV)感染的人脐血造血干细胞(HSC)向淋巴系造血祖细胞(CFU-TL)增殖分化过程中同源盒(hox)b4、b6基因的表达.方法 取健康母亲健康足月顺产儿断脐后的胎盘段脐血,采用造血祖细胞体外培养技术,分组以HCMV-AD169病毒液和(或)全反式维A酸(ATRA)持续干预,观察其不同时间点各组细胞集落生成情况,并在鉴定为CFU-TL集落细胞后不同时间点分别提取各组细胞核精核酸(RNA)并检测其完整性;将提取到的总RNA反转录为互补脱氧核糖核酸,在不同时间点采用实时荧光定量反转录PCR(FQ-RT-PCR)技术检测各组hoxb4、hoxb6基因的表达.结果 1.培养的集落细胞经瑞-姬染色法染色,鉴定为CFU-TL.2.各组所提取的RNA结构基本完整.3.人脐血HSC向CFU-TL增殖分化过程中(体外),各组hoxb4、hoxb6基因均有表达.且随培养时间推移,hoxb4基因表达的相对水平逐渐降低;而hoxb6基因表达的相对水平在培养第7天最高,第12天降低.4.与空白对照组比较,ATRA组的hoxb4、hoxb6基因表达的相对水平显著增高,而HCMV组的hoxb4、hoxb6基因表达的相对水平较低.5.与HCMV组比较,HCMV加ATRA组的hoxb4、hoxb6基因表达的相对水平较高.结论 1.hoxb4、hoxb6基因在人脐血HSC向CFU-TL增殖分化过程中(体外)均有表达,提示其均与淋巴系统造血密切相关.2.HCMV能下调CFU-TL hoxb4、hoxb6基因的表达(体外),提爪HCMV可能通过调控hoxb4、hoxb6基因表达异常导致造血功能异常.3.ATRA能显著上调正常CFU-TLhoxb4、hoxb6基因的表达.实用儿科临床杂志,2009,24(10):757-759     

人巨细胞病毒对多向造血祖细胞的影响

目的：探讨人巨细胞病毒（HCMV）对多向造血祖细胞（CFU－Mix)的抑制作用及其机制。方法：采用造血祖 外半固体培养技术,研究HCVMVAD169株对脐血CFU－Mix集落生长的影响;用原位聚合酶链反应（IS－PCR）检测集落细胞中的HCVM DNA;用免疫组化方法检测集落细胞中HCV早期蛋白P52。结果：HCMVAD169在体外能明显抑制UF－Mix集落生长,集落数随病毒感染滴度的增高而减少,抑制幅度亦加大的趋势;经IS－PCR检测发现病毒感染线CFU－Mix集落细胞中有HCVMVDNA存在,免疫组化检测发现病毒感染缄CFU－Mix涨集落细胞中有HCMV P52的表棕,结论HCMV AD169可抑制 CFU－Mix的分化、增殖;HCMV AD169对CFU－Mix有直接损害作用。此作用可能 是HCMV感染所致的粒细胞和血小板减少,贫血的主要原因;并证实CFU－Mix集落细胞右存在HCMV蛋白的早期表达。     

人巨细胞病毒对造血系统的影响

目的 探讨人巨细胞病毒(HCMV)对造血系统的影响及其机制。方法 采用造血祖细胞体外半固体培养技术,研究HCMV AD169株对粒-巨噬系祖细胞(CFU-GM)、红系祖细胞(CFU—E)、多向造血祖细胞(CFU—Mix)及巨核系祖细胞(CFU-MK)集落生长的影响;分别用原位聚合酶链反应(IS-PCR)和聚合酶链反应(PCR)检测CFU-GM、CFU-Mix、CFU-MK及CFU-E集落细胞中的HCMV DNA;用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测CFU-E集落细胞中的晚期抗原(late antigen,LA)mRNA及CFU-MK集落细胞中的前早期抗原(immediate early antigen,IEA))mRNA;用免疫组化方法检测CFU—Mix集落细胞中HCMV早期蛋白P52。结果 HCMV AD169株在体外能明显抑制CFU—GM、CFU—E,CFU—Mix及CFU—MK的生长,抑制程度与病毒感染滴度呈剂量依赖关系;经IS-PCR或PCR检测发现病毒感染组CFU-GM,CFU-E,CFU-Mix及CFU-MK细胞中有HCMV DNA存在;RT—PCR检测发现病毒感染组CFU-MK细胞中有IEA mRNA的表达,而CFU-E细胞中的LA mRNA为阴性;免疫组化(IHC)检测发现病毒感染组CFU-Mix集落细胞中有HCMV P52的表达。结论 HCMV AD169可抑制CFU-GM,CFU-E,CFU-Mix及CFU-MK的分化和增殖;HCMV AD169对造血系统有直接损害作用。此作用可能是HCMV感染所致的粒细胞和血小板减少及贫血的原因之一。     

低分子质量肝素联合更昔洛韦体外抗人巨细胞病毒的作用

目的 研究低分子质量肝素(LMWH)联合更昔洛韦(GCV)体外抗人巨细胞病毒(HCMV)感染的作用.方法 采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定LMWH联合GCV对人胚肺成纤维细胞(HELF)的最大无毒质量浓度(TC0).应用体外细胞培养技术建立HCMV-AD169感染HELF模型.固定联合药物中LMWH的TC0(625.00 mg·L-1),设LWMH 625.00 mg·L-1、GCV 35.00 mg·L-1、GCV 17.50 mg·L-1、GCV 8.75 mg·L-1、LMWH 625.00 mg·L-1+ GCV 35.00 mg·L-1、LMWH 625.00 mg·L-1+ GCV 17.50 mg·L-1、LMWH 625.00 mg·L-1+ GCV 8.75 mg·L-1 7个不同用药组,分别干预HCMV感染细胞模型,使用MTT法检测各组细胞存活率,观察感染细胞特征性细胞病变(CPE),同时应用荧光定量PCR法检测用药后各组HCMV的载量.结果 联合药物的TC0中GCV的质量浓度为375.00 mg·L-1,LMWH的质量浓度为625.00 mg·L-1.当HCMV AD169浓度为100倍半数组织培养感染量(TCID50)感染HELF时,LMWH和GCV均可提高受染细胞存活率,降低受染细胞的HCMV DNA的拷贝数;当固定LMWH的TC0,与3种不同质量浓度GCV配伍时,均在HELF上有明显的抗HCMV的生物活性,并显示配伍后的抑制作用明显大于对应质量浓度单用GCV的抑制作用(P<0.01);当联合用药中GCV剂量减半时与全量应用GCV时的抗HCMV效果相同[即GCV 35.00 mg·L-1组与联合用药LMWH 625.00 mg·L-1+GCV 17.50 mg·L-1组的病毒抑制率和DNA拷贝数比较差异无统计学意义(P>0 05)];且联合用药对细胞的毒性试验结果及显微镜下观察细胞形态变化显示,随着联合用药中二者药物质量浓度的下降,细胞存活率升高,对细胞的毒性作用减弱.结论 LMWH联合GCV具有良好的体外抗HCMV作用,二者具有协同抗病毒作用.     

脐血造血干祖细胞增殖过程中人类巨细胞病毒感染对hoxa9、hoxa10基因表达影响的研究

目的在基因水平探讨人类巨细胞病毒(HCMV)感染导致脐血CFU-G损伤的机制,探讨人类脐血造血干细胞(HSC)向粒系祖细胞(CFU-G)增殖过程中hoxa9、hoxa10基因表达的情况。方法从2006年5月至2007年10月收集12例正常足月顺产新生儿断脐后的胎盘段脐血,采用造血干细胞体外培养技术及荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)方法,以HCMV-AD169和(或)全反式维甲酸(ATRA)持续干扰HSC,观察正常对照组、ATRA组、HCMV-AD169组、ATRA+HCMV组的造血干祖细胞经人粒细胞集落刺激因子(G-CSF)诱导后,在增殖分化过程中第3、7和12天检测CFU-Ghoxa9、hoxa10基因表达情况。结果各组hoxa9、hoxa10基因均在CFU-G增殖分化的第7天表达量最高(P0.01),第12天表达量明显减弱(P0.01),与正常对照组比较,CFU-Ghoxa9、hoxa10基因表达受ATRA(6×10-8mol/L)上调,而受HCMV下调(P0.01),与HCMV组比较,ATRA可上调HCMV感染的CFU-Ghoxa9、hoxa10基因的表达。结论 CFU-G的增殖分化与hoxa9、hoxa10基因的表达相关。HCMV可能通过调控hoxa9、hoxa10基因表达异常引起造血功能异常,ATRA不仅能显著上调正常CFU-Ghoxa9、hoxa10基因的表达,而且能上调HCMV感染的CFU-Ghoxa9、hoxa10基因的表达。     

特发性血小板减少性紫癜巨核系祖细胞巨细胞病毒感染的临床研究

目的特发性血小板减少性紫癜（ITP）是儿童常见的出血性疾病,其病因尚不十分清楚。很多研究表明,该病的发生与病毒感染密切相关。探讨人类巨细胞病毒（HCMV）感染巨核系祖细胞致ITP血小板减少的发病机制及其有效的治疗方法。方法HCMV相关ITP骨髓巨核细胞集落形成单位（CFU-MK）体外培养技术收集集落细胞,采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测HCMV晚期抗原基因mRNA,并给予更昔洛韦治疗。结果46例血清HCMV-DNAPCR阳性或血清HCMV-IgM阳性的ITP骨髓巨核细胞集落形成单位（CFU-MK）集落细胞HCMV晚期抗原基因mRNA阳性19例,更昔洛韦治疗有效16例;mRNA阴性27例,更昔洛韦治疗有效4例。阳性组疗效高于阴性组,P〈0．01,差异有统计学意义。结论HCMV可感染CFU—MK而成为1TP血小板减少的原因之一。巨核系祖细胞HCMV晚期抗原基因mRNA检测阳性者更昔洛韦治疗有效,能使血小板上升或恢复正常。     

更昔洛韦和黄芪对巨细胞病毒感染所致造血祖细胞增殖抑制的影响

目的　探讨更昔洛韦 (GCV)和黄芪对巨细胞病毒 (CMV)感染所致脐血粒 巨噬系祖细胞 (CFU GM)、红系早、晚期祖细胞 (CFU E、BFU E)、多向造血祖细胞 (CFU Mix)及巨核系祖细胞(CFU Mk)体外增殖抑制的影响。方法　采用造血祖细胞培养技术 ,培养、观察、计数巨细胞病毒AD169株 (CMV AD169)感染CFU GM、CFU E、BFU E、CFU Mix和CFU Mk后各祖细胞集落、峰期及维持时间 ;用聚合酶链反应 (PCR)检测集落细胞内CMV DNA ;根据细胞毒性实验结果 ,将GCV和黄芪作用于CMV感染的CFU GM、CFU E、BFU E、CFU Mix及CFU Mk祖细胞 ,再分别计数集落、峰期及维持时间。结果 ( 1)CMV感染组CFU GM、CFU E、BFU E、CFU Mix及CFU Mk集落数较对照组明显减少 (P <0 0 1) ;集落维持时间CMV感染组较对照组明显缩短 ;( 2 )用PCR在感染组集落细胞内检测到CMV DNA的存在 ;( 3)黄芪和 (或 )GCV作用于CMV感染的祖细胞后 ,与病毒组比较集落维持时间明显延长 ,集落数和集落增殖率明显提高 (P <0 0 1) ,黄芪组集落增殖率分别为 2 7 2 %、4 5 2 %、4 9 1%、39 0 %、11 9% ;GCV组分别为 37 4 %、74 2 %、71 7%、6 7 4 %、38 9% ;GCV 黄芪组分别为 5 3 6 %、83 8%、88 7%、87 8%、6 1 5 %。结论　CMV AD169在体外能明显抑制CFU GM、CFU E、BFU     

黄芪注射液对人巨细胞病毒感染的粒-单系祖细胞体外增殖的影响

目的：探讨黄芪注射液对人巨细胞病毒(HCMV)感染的粒—单系祖细胞(CFU-GM)体外增殖的影响。方法：采用造血祖细胞体外培养技术,用黄芪干预HCMV感染的CFU-GM,观察计数CFU-GM的产率,大小,峰期及维持时间。结果：①黄芪组每2×105个细胞中CFU-GM簇和集落的产率分别为 333.33±12.69 和81.23±4.93,病毒组每2×105个细胞中簇和集落的产率分别为 167.80±16.63,53.70±1.67,两者相比差异有显著性(P<0.01)。②黄芪组大集落的比例占(9.5±0.8)%,明显高于病毒组(2.7±1.0)%,P<0.01。③黄芪组大集落峰期出现早,集落和大集落维持时间长。结论：在体外黄芪注射液可以促进HCMV感染的CFU-GM增殖。     

妊娠期低分子质量肝素干预对新生鼠肝细胞先天性感染人巨细胞病毒的影响

目的 探讨妊娠期应用低分子质量肝素(LMWH)对新生鼠肝细胞先天性感染人巨细胞病毒(HCMV)的病理改变和病毒DNA载量的影响.方法 取健康纯系清洁级Balb/c小鼠48只.随机选择配对,每对雌雄小鼠各1只.实验组20对,正常对照组4对.实验组每4对为1组,共5组,每只分别腹腔内注射6.0 log半数组织培养感染剂量(TCID50)HCMV-AD169.正常对照组4对,每只腹腔内注射相应细胞维持液高糖改良Eagles培养液(DMEM)1.0 mL.所有小鼠于接种后配对,隔离喂养,并观察受精情况,记录受精时间.发现妊娠后,分别予实验Ⅰ组皮下注射LMWH 1 000 U·kg-1,实验Ⅱ组皮下注射 LMWH 500 U·kg-1,实验Ⅲ组皮下注射LMWH 250 U·kg-1,实验Ⅳ组肌肉注射更昔洛韦(GCV)60 mg·kg-1,各10 d;实验Ⅴ组为阳性对照组,孕鼠不注射LMWH和GCV.每组随机取10只新生鼠,出生1 d处死,取出肝脏,进行病理学检查和荧光定量PCR检测.结果 实验Ⅰ组肝组织病理损害较阳性对照组明显减轻,HCMV DNA载量[(1.60±1.12)×103拷贝数/50 mg]较阳性对照组[(5.91±2.91)×107拷贝数/50 mg]显著降低(P＜0.01),与实验Ⅳ组[(1.75±1.05)×103拷贝数/50 mg]比较差异无统计学意义(P＞0.05).实验Ⅱ组肝组织炎性反应较阳性对照组稍减轻.实验Ⅲ组肝组织炎性反应与阳性对照组比较无明显变化,实验Ⅲ组HCMV DNA载量为(5.49±2.76)×107拷贝数/50 mg,与阳性对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论在妊娠期给予LMWH 1 000 U·kg-1干预能显著降低HCMV AD169株先天性感染Balb/c新生鼠肝细胞病毒感染和复制,减轻细胞炎性反应.     

造血干细胞分化过程中HOXB6基因表达及干预研究

目的探讨脐血造血干细胞(HSC)向粒-单系(CFU-GM)、红系(CFU-E)和淋巴系祖细胞(CFU-TL)增殖分化过程中HOXB6基因的表达情况及全反式维A酸(ATRA)对其的影响。方法1.采用造血干/祖细胞体外培养技术,以ATRA持续干扰人类脐血造血干/祖细胞,观察HSC经人粒细胞-单核细胞集落刺激因子(GM-CSF)、促红细胞生成素(EPO)和植物血凝素(PHA)分别诱导后,在培养第3天、第7天和第12天的CFU-GM、CFU-E及CFU-TL集落生成情况。2.采用实时荧光定量RT-PCR技术(FQ-RT-PCR)检测造血干细胞增殖分化过程中HOXB6基因的表达水平。结果1.人类造血干细胞向CFU-GM、CFU-E和CFU-TL增殖分化过程中,各组细胞HOXB6基因均有表达。2.随时间推移,CFU-GMHOXB6 mRNA在增殖分化的第3天开始表达,第7天表达最强烈,第12天表达明显减弱;CFU-E HOXB6 mRNA表达在第3天、第7天和第12天均持续增强;而在CFU-TL中,HOXB6 mRNA表达在第7天最强烈,第12天表达减弱。3.与对照组比较,ATRA可上调各组HOXB6基因的表达。结论1....