流式细胞术测定淋巴细胞的分裂

为确立流式细胞仪检测淋巴细胞的分裂的新方法 ,利用CFSE标记新鲜分离外周及胸腺淋巴细胞后 ,加入PMA、ConA、抗TCR抗体等培养 3d ,染色进行FACS分析。结果 ,诱导T细胞活化分裂的 3种刺激剂 ,以PMA刺激作用最强 ,ConA次之 ,抗TCR抗体最弱。表明CFSE标记细胞 ,流式细胞仪分析法不仅可以检测单细胞水平上细胞的分裂 ,还可根据荧光强度判断细胞的分裂次数。     

应用四色荧光标记流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群的变化

目的 探讨四色荧光标记流式细胞术(Flow cytometry,FCM)检测鼻咽癌患者服用云芝丹参胶囊后外周血淋巴细胞亚群:辅助性T淋巴细胞(CD4 ),抑制性和细胞毒T淋巴细胞(CD8 ),B淋巴细胞(CD19 ),NK(CD16 CD56 ) 细胞的绝对数和百分率等的变化.方法 收集鼻咽癌患者27例,设立中药组和安慰剂对照组,采用四色荧光标记流式细胞术对服用云芝丹参胶囊后的鼻咽癌患者外周抗凝全血的淋巴细胞亚群CD4 细胞、CD8 细胞、B细胞、NK细胞进行绝对计数和相对计数,并对两组结果进行比较分析.结果 四色荧光标记流式细胞术结果显示:接受放射治疗的鼻咽癌患者在服用云芝丹参胶囊16周后,外周血T淋巴细胞的绝对数和百分率,以及Ts、Th细胞绝对数的下降均明显低于安慰剂组(P＜0.05);中药组和安慰剂组NK细胞百分率的变化均显著增高(P＜0.05); 但两组NK细胞绝对值的变化不存在明显差异(P＞0.05).结论 云芝丹参能明显减轻放射治疗对鼻咽癌患者的淋巴毒性.     

慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞亚群相对数量特点的分析

目的分析慢性乙型病毒性肝炎患者外周血树突状细胞亚群（DC1和DC2）相对数量特点。方法采集健康人和慢性乙型肝炎患者外周静脉抗凝全血,利用荧光抗体标记和流式细胞仪检测外周血树突状细胞亚群,DC1的特异性标记为Lineage^-HLA-DR^＋CD11c^＋,DC2的特异性标记为Lineage^-HLA-DR^＋CD123^＋;电化学发光检测血清乙型肝炎病毒标志。结果慢性乙型肝炎患者外周血DC2相对数量高于健康人近两倍,但缺少统计学意义,DC1相对数量在两者间没有差别;血清HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者外周血DC2相对数量显著增高（P=0．002）,差异存在于与HBeAg阳性患者和健康人比较中（分别D1.2=129,P〈0．01;D2．3=108,P〈0．05）,而在上述3组中DC1相对数量无差异（P=0．183）。结论慢性乙型肝炎患者外周血DC2增加与HBeAg血清转换有关,提示DC2可能有抑制病毒的作用。     

流式细胞仪三标记法检测白细胞介素-10对人树突状细胞表型的影响

目的观察白细胞介素(IL)10对体外培养人树突状细胞(DC)表型的影响,探讨流式细胞术三色荧光标记抗体检测细胞表面抗原的方法及意义。方法通过SCF、GMCSF、TGFβ1、Flt3和TNFα体外培养体系,将脐血CD34+造血干细胞诱导扩增获得DC,并于成熟过程中用重组人IL10进行干预。采用流式细胞术的三色荧光标记(FITC、PE、CY)单克隆抗体直接检测技术,分析细胞表型CD1a、CD11c、CD83、CD80、CD86和HLADR。结果IL10可下调成熟中DC表面CD11c、CD83、CD80和CD86的表达。结论IL10通过抑制DC表面黏附共刺激分子表达,可调节DC的递呈抗原功能;此外,采用流式细胞仪的三色荧光标记检测方法,不仅可以节约DC细胞用量,而且具有快速和准确的优点,值得推广应用。     

多参数流式细胞术对外周血白血病免疫分型的研究

目的 :探讨多参数流式细胞术、CD45/SCC设门技术和三色荧光标记抗体 ,检测外周血在白血病免疫分型中的临床应用及其意义。方法 :对检测标本以CD45- Percp/SSC设门技术及流式细胞仪多参数分析技术 ,采用单克隆抗体三色标记对白血病患者的细胞群体进行免疫表型分析。结果 :195例白血病患者 ,其中急性白血病 14 4例 ,慢性白血病 51例。 14 4例急性白血病患者中 ,13 7例出现可供分析的白血病细胞独立群体。免疫分型结果ALL 66例 ,AML 67例 ,未能分型 4例。 2 7例AL表达 2个不同系列的免疫标记 (2 0 % )。分析了各类白血病的免疫表型的特征 ,AL共表达不同系列的抗原是一种常见现象。结论 :利用CD45 Percp/SSC设门技术及流式细胞仪多参数分析技术 ,可对白血病细胞群体进行准确的免疫表型检测和研究 ,有助于指导临床治疗及判断预后     

慢性乙型肝炎患者HBV特异性细胞毒性T细胞PD-1的表达研究

目的 检测慢性乙型病毒性肝炎患者外周血中HBV特异性CD8 细胞毒性T淋巴细胞表面细胞程序性死亡受体1(programmed cell death 1,PD-1)的表达情况.方法 采集慢性乙型肝炎患者外周血,直接离体情况下利用MHC-I-肽-五聚体技术标定HBV表位特异性细胞毒性T淋巴细胞以及荧光抗体标记细胞表面PD-1分子,经流式细胞仪检测分析.结果 在慢性乙型肝炎患者,HBV核心抗原18-27特异性CTL表达PD-1上调,达(79.0±12.5)%,显著高于总CD8 T细胞(27.7±14.8)%,以及CMV特异性CTL(20.6±5.9)%.结论 慢性乙肝患者HBV特异性CTL高表达PD-1分子,可能与慢性乙肝患者HBV特异性CTL功能低下密切相关.     

三色流式细胞术在检测人外周血CD4+CD25+CD62L+调节性T细胞的应用

随着流式细胞术(FCM)在淋巴细胞亚群分析及免疫状态分型技术领域的应用日益成熟,多参数FCM分析,已能区分不同的细胞亚群,由间接免疫荧光标记法,过渡到采用直接免疫荧光标记且从单色荧光发展到双色及多色荧光标记.     

结核病患者外周血CD4+记忆T细胞亚群的检测及意义

目的:探讨结核病患者外周血总CD4+T细胞及抗原特异性记忆T细胞的产生及分布规律,了解记忆T细胞在结核病发病中的作用.方法:以荧光标记的抗CD4、CCR7、CD45RA三种抗体共染色,用流式细胞仪检测结核病患者外周血总CD4+记忆T细胞,以荧光标记的抗人CD4、CD154、CCR7、CD45RA四种抗体共染色,检测结核...     

传统与光谱流式细胞仪对自发荧光样本检测的比较

目的 比较传统与光谱流式细胞仪检测自发荧光样本的性能。方法 以annexin V(AV)/碘化丙啶(PI)染色检测细胞凋亡为模型，制备带有自发荧光的单细胞样本，分别用传统与光谱流式细胞仪采集同一样本荧光信号。结果 自发荧光干扰异硫氰酸荧光素(FITC)通道荧光信号，传统流式细胞仪应避免使用FITC通道的荧光素；而光谱流式细胞仪可以清楚分辨FTIC通道的荧光素和自发荧光。同时优化了样本制备方法和annexin V/PI染色方案。结论 光谱流式细胞仪对于自发荧光样本的检测在一定条件下具有相对优良的性能。     

流式细胞术研究细胞增殖的方法与技术

流式细胞术是检测细胞增殖的一种重要手段,较以往的检测方法,流式细胞仪的优点在于能够实现多荧光指标同时检测,并且可以对混合样品中的特定细胞进行增殖分析,本文就目前常用细胞增殖检测染料的检测原理,应用范围及染色方法作进行阐述。