三磷酸肌醇剌激心肌成纤维细胞的增殖

目的　探讨钙调神经磷酸酶 (CaN)依赖的信号通路在三磷酸肌醇 (IP3)剌激的乳鼠心肌成纤维细胞 (FBs)增殖中的作用。方法　以培养的FBs为模型 ,用IP3剌激FBs内Ca2 +释放 ,环孢素A(CsA)阻断CaN ,维拉帕米 (Ver)阻断FBs钙通道 ,检测FBs的CaN、丝裂素活化蛋白激酶 (MAPK)、蛋白激酶C(PKC)活性 ,用3H 亮氨酸及3H 胸腺嘧啶掺入量作为反应FBs增殖的指标。结果　IP3剌激组FBs蛋白核酸合成速率明显增高 ,与对照组相比差异显著 (P <0 .0 1 ) ;CsA及Ver能明显抑制IP3介导的FBs蛋白核酸合成速率增高 ,与IP3剌激组相比差异显著 (P <0 .0 1 )。同时发现IP3剌激组CaN、PKC活性与对照FBs相比差异显著 (P <0 .0 5,P <0 .0 1 )。CsA和Ver抑制IP3介导的FBs的CaN活性增高 ,Ver抑制IP3介导的FBs的PKC活性增高。结论　CaN在IP3剌激的FBs增殖中起重要作用 ,但CaN信号通路不是IP3剌激FBs增殖的唯一信号通路 ,其它信号通路也可能参与了IP3剌激的FBs增殖。     

三磷酸肌醇刺激心肌成纤维细胞的增殖

目的探讨钙调神经磷酸酶(CaN)依赖的信号通路在三磷酸肌醇(IP3)刺激的乳鼠心肌成纤维细胞(FBs)增殖中的作用.方法以培养的FBs为模型,用IP3激FBs内Ca2+释放,环孢素A(CsA)阻断CaN,维拉帕米(Ver)阻断FBs钙通道,检测FBs的CaN、丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)、蛋白激酶C(PKC)活性,用3H-亮氨酸及3H-胸腺嘧啶掺入量作为反应FBs增殖的指标.结果IP3刺激组FBs蛋白核酸合成速率明显增高,与对照组相比差异显著(P＜0.01);CsA及Ver能明显抑制IP3介导的FBs蛋白核酸合成速率增高,与IP3刺激组相比差异显著(P＜0.01).同时发现IP3剌激组CaN、PKC活性与对照FBs相比差异显著(P＜0.05,P＜0.01).CsA和Ver抑制IP3介导的FBs的CaN活性增高,Ver抑制IP3介导的FBs的PKC活性增高.结论CaN在IP3刺激的FBs增殖中起重要作用,但CaN信号通路不是IP3剌激FBs增殖的唯一信号通路,其它信号通路也可能参与了IP3刺激的FBs增殖.     

诱导型一氧化氮合酶在脂多糖诱导多巴胺能神经元变性时的变化研究

目的探讨诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达上调是否参与脂多糖(LPS)诱导的多巴胺(DA)能神经元变性。方法脑立体定位注射5μgLPS至大鼠脑黑质,观察不同时间点(6、12h,1、3、7d),iNOSmRNA及蛋白表达的动态变化;化学比色法检测黑质NO释放量以及iNOS活性改变。结果iNOSmRNA和蛋白的动态变化为6h开始出现增高,1d达高峰,3d开始下降,7d后基本消失。1d时iNOS阳性细胞数(45.30±4.63)显著高于PBS对照侧iNOS阳性细胞数(0.11±0.04)(P<0.01)、RT-PCR、Western印迹法显示1d组iNOSmRNA和iNOS蛋白表达明显多于正常对照组和PBS对照侧;同时发现iNOSmRNA和蛋白过度表达,并促进NO释放,iNOS活性升高。结论iNOS上调可能是LPS诱导DA能神经元变性机制中重要的因素之一。     

螺内酯对自发性高血压大鼠血管外膜诱导型一氧化氮合酶活性的影响

目的 观察醛固酮受体拮抗剂螺内酯干预自发性高血压大鼠(SHR)对血管外膜诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的影响,探讨醛固酮在血管损伤性疾病中的作用及机制.方法 10周龄雄性SHR大鼠20只,分成2组:螺内酯组(10只,20 mg·kg~(-1)·d~(-1)螺内酯灌胃)和对照SHR组(10只,等量自来水灌胃),10周龄雄性WKY大鼠10只作为正常对照组(等量自来水灌胃),共干预6周.各组均于干预前后每周测1次尾动脉收缩压.6周后处死,取主动脉,测定血管外膜L-精氨酸(L-Arg)摄取、iNOS活性(~3H-瓜氨酸生成法)及NOx含量(Griess 法测定).结果 对照SHR组血管外膜iNOS活性[(12.55±2.27)pmol·mg~(-1)·min~(-1)]、[~3H]-L-Arg摄取[(0.88±0.19)nmol·mg~(-1)·min~(-1)]及NOx含最[(2.07±0.39)μmol/L]较对照WKY组[分别为(5.96±1.87)pmol·mg~(-1)·min~(-1),(0.51±0.15)nmol·mg~(-1)·min~(-1)(1.55±0.32)μmol/L,均P<0.01]显著增高,与对照SHR组比较,螺内酯组血管外膜iNOS活性[(8.32±1.84)pmol·mg~(-1)·min~(-1)]、[~3H]-L-Arg摄取[(0.61±0.15)nmol·mg~(-1)·min~(-1)]和NOx含量[(1.64±0.27)μmol/L]显著下降(均P<0.01).结论 螺内酯能够抑制SHR血管外膜L-Arg-iNOS-NO系统.醛固酮参与血管外膜L-Arg-iNOS-NO通路的激活,这种激活除了通过参与血压升高间接发挥作用外,可能还具有直接作用.     

芦荟多糖对小鼠腹腔巨噬细胞NO生成和iNOS酶活性的影响

目的探讨芦荟多糖(AloePolysaccharides,AP)对体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞一氧化氮(nitricox-ide,NO)生成和诱导型一氧化氮合酶(induciblenitricoxidesynthase,iNOS)酶活性的影响。方法体外培养小鼠腹腔巨噬细胞,分别用0～400mg/L浓度的AP刺激24h,采用Griess反应测定NO生成量,荧光法检测iNOS活性。结果AP在25～400mg/L浓度范围内作用于小鼠腹腔巨噬细胞24h后,NO生成量增加、iNOS活性增高,除低浓度AP组(25mg/L)外,其余各浓度组差别均具有非常显著性意义(P<0.01),并呈显著正相关(r=0.7523,P<0.01);转录抑制剂放线菌素D、蛋白质合成抑制剂放线菌酮和NOS竞争性抑制剂L-NMA,均能有效抑制AP所诱导的巨噬细胞NO生成和细胞内iNOS活性(P<0.01)。结论AP能促进细胞内iNOS基因表达,以从头合成方式促进细胞NO合成和释放,所释放的NO可能参与AP的免疫调节过程。     

黄药子甲醇提取物对LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞释放NO及iNOS表达的影响

研究黄药子甲醇提取物(EED)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠腹腔巨噬细(Mφ)一氧化氮(NO)的生成和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达的影响。采用Griess试剂法检测NO含量和RT-PCR检测iNOSmRNA的表达。发现EED能够计量依赖性减少LPS刺激Mφ的NO生成,其中EED50μg/ml和100μg/ml能显著抑制腹腔Mφ释放NO;同时EED也能够计量依赖性抑制LPS刺激Mφ的iNOSmRNA的表达。说明黄药子甲醇提取物具有抑制LPS诱导的巨噬细胞NO生成和iNOSmRNA的表达的药理学效应。     

诱导型一氧化氮合酶与移植血管平滑肌细胞增生的关系

目的　探讨诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)与移植血管平滑肌细胞增生的关系。方法　新西兰大白兔 15只随机分成 3组 ,建立双侧颈动脉间置移植颈外静脉的动物模型。高剂量组每日喂食L 精氨酸 (L Arg) 2 5 0mg/kg ,低剂量组每日喂食L Arg 12 5mg/kg ;对照组不喂食L Arg ,持续 2周。检测血浆和组织匀浆一氧化氮(NO)水平 ,移植血管iNOSmRNA表达。观察术后 3和 6周移植血管平滑肌细胞增生。结果　 1.iNOS活性 :(1)血浆NO水平 :实验组血浆NO水平显著高于对照组 ,高剂量组血浆NO水平高于低剂量组 ;(2 )组织匀浆一氧化氮合酶 (NOS)活性 :实验组组织匀浆NOS活性显著高于对照组 ;(3)组织匀浆iNOSmRNA表达 :术后 3周实验组iNOSmRNA表达 ,对照组无表达 ;术后 6周实验组iNOSmRNA表达高于对照组 ,高剂量组高于低剂量组。 2 .移植血管平滑肌细胞形态学变化 :(1)SMA免疫组化染色 :实验组移植血管平滑肌细胞厚度低于对照组 ;术后 6周低剂量组移植血管平滑肌细胞厚度低于高剂量组 ;(2 )PCNA免疫组化染色 :术后 3周实验组平滑肌细胞增殖低于对照组 ;术后 6周低剂量组平滑肌细胞增殖低于对照组和高剂量组。结论　iNOS表达致体内NO水平增高可抑制移植血管平滑肌细胞增生 ;NO浓度与平滑肌细胞增生关系密切     

糖皮质激素对双氯氛酸钠肝损伤大鼠一氧化氮合酶及一氧化氮的影响

目的探讨糖皮质激素地塞米松(Dex)对双氯氛酸钠(Dcf)肝损伤大鼠一氧化氮合酶(NOS)表达及一氧化氮(NO)的影响。方法大鼠随机分为正常组、Dcf组及Dex组。Dcf组给予Dcf 100 mg/kg腹腔注射,Dex组在Dcf注射前1 h予10 mg/kg腹腔注射,24 h后测血清ALT、AST、TBil水平观察肝组织病理学变化,化学法检测血清及肝组织NO含量,免疫组化法检测肝组织内皮型NOS(eNOS)和诱导型NOS(iNOS)的表达。结果 Dcf组血清ALT、AST、TBil水平明显升高(P0.05),病理积分大幅度增高,血清和肝组织NO含量明显高于正常组(P0.01),肝组织iNOS表达显著增强(P0.01),eNOS表达减弱。Dex可明显改善升高的转氨酶及病理积分(P0.05),并降低肝组织iNOS表达及NO含量(P0.05)。结论 iNOS和NO在Dcf肝损伤中起促进作用,糖皮质激素可能通过抑制体内iNOS表达,减少NO合成起到肝保护作用。     

模拟失重对肺组织iNOS表达的影响及地塞米松的防治作用

目的 研究尾悬吊模拟失重大鼠肺组织诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)表达的变化及地塞米松对这一变化的影响.方法 采用尾悬吊模拟失重,分为悬吊7、21 d及相应对照组和地塞米松干预组,每组10只,共50只大鼠.采用免疫组织化学技术检测肺组织iNOS的表达情况,采用原位杂交技术检测肺组织iNOSmRNA的表达情况,并观察应用地塞米松干预后肺组织iNOS的表达情况.结果 同对照组相比,7 d尾悬吊模拟失重大鼠肺组织iNOS的表达水平明显增高(P＜0.05),21 d尾悬吊模拟失重大鼠肺组织iNOS的表达水平亦显著增高(P＜0.05),同时血管内皮阳性细胞数目显著增多(P＜0.01).7 d尾悬吊模拟失重大鼠肺组织iNOSmRNA的表达水平明显增高(P＜0.01),21 d尾悬吊模拟失重大鼠肺组织iNOSmRNA的表达水平也显著增高(P＜0.01).地塞米松干预后大鼠肺组织iNOS的表达明显减低(P＜0.05).结论 模拟失重可使肺组织iNOS活性增强,这可能是模拟失重造成肺损伤的重要机制之一,地塞米松可用于抑制模拟失重时肺组织一氧化氮的产生过程.     

一氧化氮合酶在子宫肌瘤中的表达及意义

目的　检测内皮型一氧化氮合酶 (eNOS)及诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)在子宫肌瘤组织中的表达 ,探讨NOS在子宫肌瘤发生、发展过程中的作用。方法　应用免疫组织化学法 (SP法 )检测eNOS及iNOS在子宫肌瘤中的表达。结果　子宫肌瘤中eNOS及iNOS的表达与其对照组相比显著增高 (P <0 .0 5 ) ;eNOS与iNOS相比 ,eNOS的表达显著高于iNOS(P <0 .0 0 5 )。结论　NO含量的增多可能是子宫肌瘤发生、发展过程中的一个重要环节 ,子宫肌瘤组织中NOS表达增高 ,特别是eNOS表达增高是NO合成增多的重要原因之一     

醛固酮与螺内酯对肝星状细胞增殖及胶原合成的影响

目的　探讨醛固酮 (ALD)、螺内酯对大鼠肝星状细胞 (HSC)增殖、胶原合成的影响。方法　大鼠HSC培养 ,在不同浓度的ALD、螺内酯作用下 ,采用3 H 胸腺嘧啶核苷 (3 H TdR)、3 H 脯氨酸 (3 H Pro)掺入法及流式细胞技术观察ALD、螺内酯对HSC增殖及胶原合成的影响。结果　ALD在 10 -4mol/L高浓度时3 H TdR、3 H Pro掺入量与对照组相比明显增多 (P <0 .0 5 ) ,螺内酯在浓度高于 10 -6mol/L时 ,HSC3 H TdR、3 H Pro掺入量明显减少 ,螺内酯阻止HSC于G1期 ,ALD +螺内酯组与对照组相比差异无显著意义 (P >0 .0 5 )。结论　高浓度ALD可以促使HSC增殖 ,其拮抗剂螺内酯明显抑制HSC的增殖及合成胶原。     

NO与巨噬细胞抗肿瘤细胞毒效应的关系

目的：探讨LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞iNOS mRNA表达，NO产生与巨噬细胞细胞毒作用的关系。方法：应用RT－PCR、硝酸还原酶法、^3HTdR掺入法分别观察LPS诱导的巨噬细胞iNOS mRNA表达、NO产生以及巨噬细胞抗肿瘤细胞毒作用。结果：LPS能够诱导iNOS mRNA表达和NO的生成。iNOS特异性抑制剂充分抑制NO生成的同时，显著降低巨噬细胞对HL－60的细胞毒作用，却不影响巨噬细胞对K562细胞的细胞毒作用。结论：NO是激活巨噬细胞参与的非特异性细胞免疫的重要效应分子之一，但在巨噬细胞对不同肿瘤的抑制效应中发挥的作用不尽相同。     

血管外膜源一氧化氮对尾加压素Ⅱ诱导的血管平滑肌增殖的抑制作用

目的观察血管外膜生成的一氧化氮(NO)对尾加压素Ⅱ(UrotensionⅡ,UⅡ)刺激的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响及机制。方法取大鼠胸主动脉,去除内皮,分以下几组进行组织孵育10h①完整外膜血管组;②单纯中膜组;③中膜与剥离的外膜共育组;④中膜与用L-N-硝基精氨酸(L-NNA)预处理的外膜共育组。每例胸主动脉剪为二段,分两个亚组UⅡ(10-7mol/L)组和对照组。3H-胸腺嘧啶(3H-TdR)掺入法检测各组VSMC的细胞增殖。另取大鼠腹主动脉外膜,用10-8和10-7mol/LUⅡ刺激4h。Griess法测血管外膜生成的亚硝酸盐(NO2-)含量,3H-L-精氨酸(3H-L-Arg)标记的同位素法测定外膜一氧化氮合酶(NOS)活性。结果①各UⅡ亚组3H-TdR掺入比相应对照组分别增加62.9%～98.3%(均P<0.01)。②在10-7mol/LUⅡ刺激下,完整外膜组及中膜+外膜组的3H-TdR掺入分别比单纯中膜组低20.5%和20.3%(P<0.01);中膜+L-NNA预处理的外膜组3H-TdR掺入分别比中膜+外膜组及完整外膜组高27.1%和27.3%(P<0.01),而与单纯中膜组差异无显著性(P>0.05)。③与对照组相比,10-8和10-7mol/L的UⅡ使外膜NOS活性分别增加92.1%和177%(P<0.01);使外膜生成的NO2-含量分别增加88.7%和178%(P<0.01)。结论血管外膜生成的NO可抑制UⅡ刺激的VSMC的增殖,其抑制作用为UⅡ激活的血管外膜NOS/     

诱生型一氧化氮合酶及一氧化氮对心脏的作用

目的介绍诱生型一氧化氮合酶(iNOs)介导的一氧化氮在心脏中的作用的研究进展。方法采用文献回顾的方式对国内外相关文献进行分析整理,对一氧化氮合酶的结构功能、一氧化氮在心脏中的作用的方式进行综述。结果iNOs介导的一氧化氮在心脏中的表达是导致心脏功能障碍的重要原因,iNOs的表达对心脏功能有保护和损伤两个方面的争论。结论iNOs在心脏中保护和损伤双重作用主要取决于分泌方式、一氧化氮浓度以及信号传导方式。     

烧伤大鼠胃组织中一氧化氮合酶的变化观察

目的 研究烧伤后大鼠胃组织中一氧化氮合酶（ＮＯＳ）的变化及与一氧化氮（ＮＯ）的关系。方法 采用３０％ＴＢＳＡⅢ度烧伤大鼠模型,分别检测了胃组织中ＮＯ含量及原生型ＮＯＳ（ｃＮＯＳ）和诱导型ＮＯＳ（ｉＮＯＳ）的活性,并分析了ＮＯ的变化规律及其与两型ＮＯＳ之间的关系。结果 烧伤后胃组织中ｉＮＯＳ活性大幅上升,与ＮＯ的变化趋势一致,二者呈显著正相关（ｒ＝０．９４,Ｐ〈０．０１）,而ｃＮＯＳ活性呈下降趋势,与ＮＯ相关不显著（ｒ＝－０．５３,Ｐ〉０．０５）。结论 烧伤后胃组织中ＮＯ的变化受ｉＮＯＳ活性影响,ｉＮＯＳ活性上升,ｃＮＯＳ活性下降可能与烧伤后胃肠道病理变化密切相关。     

神经节苷脂GM-1对脑缺血再灌注大鼠诱导型-氧化氮合成酶的影响

目的:研究单唾液酸四已糖神经节苷脂(GM-1)对脑缺血再灌注后诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)的影响并探讨其可能机制.方法:采用线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞模型,缺血2 h再灌注22 h.将雄性SL大鼠随机分成假手术组,模型对照组和GM-1处理组(15、30、60 mg/kg 3个给药剂量组).通过红四氮唑(TTC)染色和图像分析计算各组脑梗死体积,采用生物化学法测量各组伤侧脑中NO含量和iNOS活性.结果:与模型对照组相比,GM-1中、高剂量处理组脑梗死体积缩小,iNOS活性和NO量下降,低剂量组变化不明显.结论:脑缺血后iNOS升高与脑损伤关系密切,而GM-1可以对抗iNOS和NO上升,并减轻脑缺血损伤.     

高脂血症大鼠肾脏一氧化氮变化及其意义

为探讨高脂饲料对大鼠肾脏的损害及其一氧化氮的变化,用含４％胆固醇及１％胆酸钠的饲料饲喂大鼠建立高脂模型,观察大鼠尿蛋白排泄量,测定血清脂质及肾皮质、尿一氧化氮含量,并测肾组织诱生型一氧化氮合酶的表达及肾组织中细胞凋亡情况。结果显示８周后大鼠肾皮质及尿中一氧化氮含量增多,２４ｈ尿蛋白排泄增加,肾小管诱生型一氧化氮合酶表达增强,其表达强度与肾组织中细胞凋亡数量正相关。揭示在高脂饮食导致的肾损害中诱生型一氧化氮合酶可能通过诱导细胞凋亡参与肾小管间质损害