大鼠重度烫伤后早期心肌组织内缺氧诱导因子-1α表达的变化

目的　观察烫伤大鼠伤后早期心肌组织中缺氧诱导因子 1α(HIF 1α)mRNA和蛋白的表达变化 ,探讨其意义。　方法　制作 4 0 %TBSAⅢ度烫伤大鼠模型 ,设正常对照组及伤后不同时相组。取心脏解剖左、右心室 ,采用逆转录聚合酶链式反应 (RT PCR)法检测HIF 1αmRNA的表达 ,采用蛋白免疫印迹法测定其蛋白水平的变化。　结果　正常大鼠左、右心室肌HIF 1αmRNA、蛋白表达结果有所不同。大鼠烫伤后 ,心肌组织内HIF 1αmRNA水平、蛋白表达量明显升高 (P <0.0 1)。结论　正常状态下 ,大鼠左心室肌对缺血缺氧耐受能力较右心室肌强。严重烫伤可以诱导大鼠心肌细胞HIF 1α表达增加 ,介导心肌保护效应     

RNA干扰抑制缺氧诱导因子1α表达对缺氧内皮细胞通透性的影响

目的 了解RNA干扰技术特异性抑制缺氧诱导因子1α(HIF-1α)表达对缺氧血管内皮细胞通透性的影响.方法 利用质粒pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR构建针对人HIF-1α基因的RNA干扰表达载体.将VE细胞分为正常对照组、缺氧组(置于含体积分数1%O_2的混合气体环境中缺氧处理6 h)、转染组、转染缺氧组(转染载体后再进行缺氧处理).采用RT-PCR法检测正常对照组、转染组HIF-1αmRNA表达,采用蛋白质印迹法检测4组细胞HIF-1α蛋白表达.荧光分光光度计检测单层VE细胞的通透性.将上述缺氧处理替换为HIF-1α特异性诱导剂1 mmol/L二甲氧乙二酰甘氨酸(DMOG),分为DMOG组、转染DMOG组、正常对照组、转染组,采用蛋白质印迹法观察各组HIF-1α蛋白表达.除通透性检测数据用荧光强度值表示外,其他数据用密度比值表示.实验结果进行组间两两t检验.结果 正常对照组细胞HIF-1α mRNA相对含量为0.765±0.069,转染组细胞HIF-1α mRNA相对含量为0.093±0.007,组间比较,差异有统计学意义(t=16.696,P<0.05).转染缺氧组细胞HIF-1α蛋白含量为0.591±0.029,显著低于缺氧组(2.612±0.259,t=13.415,P<0.05);转染DMOG组HIF-1α蛋白含量为0.566±0.008,显著低于DMOG组(3.243±0.551,t=6.975,P<0.05).缺氧组单层血管内皮细胞通透性(41.6±11.1)较正常对照组(9.4±1.5)显著升高(t=6.238,P<0.05),转染缺氧组单层血管内皮细胞通透性(13.3±4.5)显著低于缺氧组(t=5.430,P<0.05).结论 采用特异性针对HIF-1α基因的RNA干扰技术,能有效抑制内皮细胞HIF-1α表达,并明显抑制缺氧引起的血管内皮细胞通透性增强.     

XBP1在氯化钴诱导骨肉瘤细胞缺氧环境下抗凋亡作用实验研究

目的探讨在氯化钴诱导骨肉瘤细胞缺氧情况下,X盒结合蛋白1(XBP1)在骨肉瘤细胞中表达量的变化、其对细胞凋亡的影响及与低氧诱导因子(HIF)-1α信号转导通路的关系。方法通过氯化钴诱导骨肉瘤MNNG、MG-63细胞达到模拟缺氧状态,通过实时聚合酶链式反应(PCR)检测不同时间、不同氯化钴浓度下HIF-1α和XBP1的表达情况;采用流式细胞仪检测骨肉瘤细胞凋亡率;采用siRNA干扰技术,下调XBP1。实验将骨肉瘤细胞分为干扰组(经XBP1 siRNA转染骨肉瘤细胞)和空白对照组(未经XBP1 siRNA转染骨肉瘤细胞)。结果 XBP1表达具有氯化钴浓度和时间依赖性:一定范围内,随着氯化钴浓度增高和时间延长,XBP1表达升高;敲除XBP1后,干扰组骨肉瘤细胞凋亡率明显高于对照组(P0.05);PCR检测HIF-1α及下游靶基因mRNA表达无明显变化(P0.05)。结论 XBP1在氯化钴诱导缺氧的骨肉瘤细胞中表达明显增高,其对骨肉瘤细胞在缺氧环境下抗凋亡有明显作用,其抗凋亡作用与HIF-1α信号转导通路无直接关联,具体机制有待进一步研究。     

缺氧诱导因子1α依赖性缺氧诱导人肝癌细胞多药耐药相关基因的表达及意义

目的探讨缺氧环境下人肝癌细胞中多药耐药相关基因和缺氧诱导因子1α(HIF1α)的表达和意义,从而部分阐明肝细胞癌发生多药耐药的机制,为逆转肝癌耐药提供新的分子靶点。方法将人肝癌细胞系HepG2细胞分别行不同时间低氧培养和转染HIF1α/PCDNA3质粒;应用荧光定量聚合酶链反应技术和蛋白免疫印迹技术分别检测每组HepG2细胞中多药耐药相关基因(mdr1)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)和肺耐药相关蛋白(LRP)在mRNA和蛋白水平的表达。结果在缺氧组,随着缺氧时间的延长HepG2细胞中多药耐药相关基因mdr1、MRP1和LRP的表达均逐渐增高,且以MRP1变化更为显著;而且这些多药耐药相关基因的表达升高与缺氧诱导因子1α的表达呈同步化改变。在HIF1α/PCDNA3质粒转染细胞中这些多药耐药相关基因的表达亦明显升高。结论缺氧可通过核转录因子HIF1α上调肝癌细胞内mdr1,LRP、MRP1等多药耐药相关基因的表达,从而使肝细胞癌获得多药耐药性。生长局部微环境的缺氧是诱导肝癌产生多药耐药性的重要原因之一。核转录因子HIF1α和这些多药耐药相关基因将可能成为逆转肝癌耐药的新的分子靶点。     

缺氧诱导因子1α对缺氧条件下大鼠心肌细胞糖酵解的影响

目的观察缺氧诱导因子1α(HIF-1α)对缺氧状态下大鼠心肌细胞糖酵解的影响。方法常规分离、培养大鼠心肌细胞,分为单纯缺氧组:使用无糖培养基在低氧混合气体(体积分数94%N2、5%CO2、1%O2)中培养;HIF-1α抑制组:先利用RNA干扰技术构建HIF-1α蛋白低表达的细胞模型,再作上述缺氧培养。两组细胞均设缺氧前(常规培养)及缺氧1、3、6、12、24h6个时相点,采用生物化学方法检测细胞中糖酵解关键酶己糖激酶(HK)、磷酸果糖激酶(PFK)、乳酸脱氢酶(LDH)的活性以及培养上清液中乳酸(LA)的含量。结果(1)HK、PFK活性:与缺氧前比较,两组心肌细胞两酶活性均呈先升高后下降的变化趋势。单纯缺氧组两酶活性峰值分别为(159±13)、(298±44)U/g.HIF-1α抑制组两酶活性在缺氧1、3、6h时均明显低于单纯缺氧组(P<0.05或0.01),其峰值分别为(133±55)、(188±55)U/g.(2)LDH活性、LA含量:与缺氧前(92±12)U/g比较,单纯缺氧组细胞LDH活性缺氧后显著升高,6h时达高峰(2568±125)U/g(P<0.01),随后逐渐下降;各时相点培养上清液中LA含量也成倍增加。HIF-1α抑制组细胞的LDH活性于缺氧3h时达峰值(2125±126)U/g,明显高于缺氧前(P<0.01);培养上清液中LA含量亦较缺氧前增高(P<0.01),但增幅较小。结论缺氧条件下大鼠心肌细胞中HIF-1α高表达是细胞糖酵解持续增强的直接原因,此为心肌细胞应对缺氧环境的重要内源性保护机制。     

肝癌组织中乙肝病毒x蛋白与缺氧诱导因子-1α的相关性

目的　探讨乙型肝炎病毒x蛋白 (HBx)与缺氧诱导因子 1α(HIF 1α)在肝癌组织中表达的相关性及其在肝癌的发生和发展中的作用。方法　采用免疫组织化学染色方法检测 14 1例福马林固定、石蜡包埋的原发性肝癌组织标本HBx和HIF 1α表达 ;用Lipofectamine2 0 0 0将 pHA HBx质粒转染HepG2细胞 ,G418筛选阳性克隆 ,逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)检测转染后细胞HBx基因和HIF 1α基因转录 ;免疫细胞化学染色检测转染细胞HIF 1α表达。结果　 14 1例肝癌组织标本中 ,HBx和HIF 1α免疫组织化学染色阳性者分别为 98例和 116例 ;转染HBx基因后的HepG2细胞RT PCR结果表明 ,HIF 1α基因呈阳性表达 ,而未转染细胞则为阴性 ;免疫细胞化学染色显示 ,转染后的细胞 75 %HIF 1α表达阳性 ,未转染细胞几乎未见阳性细胞。结论　肝癌组织中HBx与HIF 1α的表达明显相关 (P <0 .0 1) ,HBx可以明显上调肝癌组织中HIF 1α的表达 ,两者的共同表达对原发性肝癌细胞的生物学行为可能有重要影响。     

血管瘤中缺氧诱导因子-1α的表达和血管生成的研究

目的　探讨缺氧诱导因子- 1α(HIF-1α)在血管瘤中的表达以及其和血管内皮细胞生长因子 (VEGF)、新生微血管密度 (MVD)的关系。方法　采用免疫组化SP法检测 2 8例婴幼儿血管瘤中HIF 1α、VEGF的蛋白表达和MVD。结果　 2 8例血管瘤中HIF-1α、VEGF的蛋白表达阳性率分别是6 4 % ,71.4 %。其中增生期和消退期HIF 1α阳性率分别为 87.5 %、33.3% (P <0.0 1) ,VEGF阳性率分别为 93.7%、4 1.7% (P <0.0 1) ;MVD分别为 73 4± 14 6 3、30 2± 9 1(P <0.0 1)。HIF 1α蛋白表达与VEGF成正相关 (P <0.0 1) ,HIF 1α和VEGF与MVD都成正相关 (P <0.0 1)。结论　血管瘤增生期血管内皮细胞存在着特殊的缺氧微环境 ,并通过HIF-1α表达水平提高调节VEGF等血管生成相关因子表达水平升高 ,促进了新生微血管生成     

机械牵张对缺血缺氧心肌细胞肌球蛋白重链mRNA表达的影响

目的　探讨机械牵张对缺血缺氧心肌细胞肌球蛋白重链 (MHC)mRNA表达的影响。方法　建立离体培养的SD乳鼠心肌细胞机械牵张模型 ,并施加无糖缺氧刺激因素 ,模拟烧伤后缺血缺氧损害。实验分 10 %牵张组、缺血缺氧培养组、10 %牵张 缺血缺氧培养组 ,每组每时相点 3皿细胞。各组分别在刺激前和刺激后 1、3、6、12h时相点进行观察。采用二步法逆转录聚合酶链反应检测心肌细胞MHCmRNA表达的变化 ,并用凝胶软件进行分析。　结果　与刺激前比较 ,10 %牵张组α、β型MHCmRNA表达均增加 ,但以 β型增加为主 (P <0.0 1)。缺血缺氧培养组α MHCmRNA向 β MHCmRNA转化加速 ,且缺氧 12h后心肌细胞α MHCmRNA下调明显 (P <0.0 5);β MHCmRNA表达先升后降 ,6h表达最强 (P <0.0 5 )。10 %牵张 缺血缺氧培养组α MHCmRNA向 β MHC mRNA转化明显 ,随机械刺激时间的延长转化加剧 ;12h后α、β型MHCmRNA表达均下调 (P <0.0 5)。　结论　机械牵张进一步加剧缺血缺氧对MHCmRNA表达的下调 ,可能是严重烧伤后早期心肌功能降低的原因之一。     

骨形态发生蛋白-7基因转染对新生大鼠心肌细胞缺氧-复氧时凋亡的影响

目的 探讨骨形态发生蛋白-7(BMP-7)基因转染对新生大鼠心肌细胞缺氧-复氧时凋亡的影响.方法 体外培养的新生大鼠心肌细胞分为3组:正常对照组(C组)、缺氧-复氧组(HR组)培养的心肌细胞置于95%N2-5%CO2混合气体饱和的缺氧罐中缺氧2 h后,放回孵育箱中继续培养4 h;BMP-7基因转染组(BT组)将含pcDNA3.1-BMP-7基因的质粒在转染试剂作用下转染心肌细胞后72 h再行缺氧2 h,复氧4 h.每组重复8次.计数心肌细胞搏动次数,采用全自动生化分析仪测定乳酸脱氢酶(LDH)活性.倒置显微镜下观察心肌细胞形态.采用流式细胞仪检测心肌细胞凋亡情况,免疫细胞化学方法测定Bcl-2、Bax蛋白的表达.结果 与c组相比,HR组和BT组心肌细胞LDH活性、细胞凋亡率增加,Bax蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调(P＜0.05);与HR组相比,BT组心肌细胞LDH活性、细胞凋亡率降低,Bax蛋白表达下调,Bcl-2蛋白表达上调(P＜0.05).结论 BMP-7基因转染可减轻新生大鼠心肌细胞缺氧-复氧损伤,其机制可能与调控Bcl-2、Bax蛋白的表达,抑制心肌细胞凋亡有关.     

反义缺氧诱导因子-1α对胰腺癌生长转移的影响

目的观察反义缺氧诱导因子（HIF）-1α对胰腺癌生长、转移的影响及其与β1-integrin的关系。方法缺氧条件下（0.5％O2）体外培养4h，未转染反义HIF-1α质粒的BxPc-3细胞设为缺氧对照组；常氧条件下体外培养，未转染反义HIF-1α质粒的BxPc-3细胞设为常氧对照组；缺氧条件下（0．5％O2）体外培养4h，稳定转染反义HIF-1α质粒的BxPc-3细胞设为实验组。采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot检测HIF-1α和β1-integrin的表达情况。Transwell侵袭室方法检测BxPc-3细胞侵袭能力。裸鼠皮下接种BxPc-3细胞8周后，观察各组肿瘤生长情况。结果实验组HIF-1α和β1-integrin的表达明显降低，迁移的细胞数远少于对照组（P〈0．05）；实验组肿瘤的体积、重量、生长速度远低于对照组（P〈0.05）。结论反义HIF-1α可能通过阻断β1-integrin的表达而抑制胰腺癌的生长和转移。因此，阻断HIF-1α的表达为胰腺癌基因治疗提供了新途径。     

新生鼠缺氧缺血性脑损伤缺氧诱导因子1α表达与神经元凋亡

目的探讨缺氧缺血性脑损伤（hypoxia ischemia braindamage，HIBD）时缺氧诱导因子1α（hypoxiainducible factor 1α，HIF—1α）表达与神经元凋亡的相关性，探索HIF—1α在神经元凋亡中的作用及对损伤神经修复重建的意义。方法新生10dSD大鼠40只，随机分为对照组和实验组，每组20只。实验组在乙醚麻醉下行右侧颈总动脉结扎，氮氧混合气（92％氮气、8％氧气）缺氧2．5h，即为HIBD模型；对照组分离颈总动脉，不结扎，不作缺氧处理。分别于术后4、8、24、48及72h处死两组动物取脑组织，应用免疫组织化学法检测HIF—1α、活化的半胱天冬氨酸酶3（cleavedcaspase 3，CC3）的表达，应用TUNEL检测凋亡细胞。结果实验组H1F～1a蛋白表达在术后4h明显升高，8h达高峰，24h后下降；CC3蛋白于术后4h开始表达，8h有少量表达，24h明显升高，48h及72h维持较高水平。对照组各时间点HIF1α和CC3均有极少量弱阳性表达。实验组HIF—1α和CC3蛋白表达明显高于对照组，差异有统计学意义（P〈0．01）。TUNEL染色显示实验组术后随时间延长阳性细胞数逐渐增多，72h达高峰；但对照组TUNEL阳性细胞极少。两组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。结论HIF—1α与促凋亡蛋白CC3表达趋势相反，HIF—1α对新生儿HIBD神经元可能具有保护作用，可望对缺氧缺血神经的修复重建发挥一定作用。     

缺氧诱导因子转染内皮祖细胞治疗大鼠缺血后肢

目的 使用缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)转染内皮祖细胞(EPC)治疗大鼠后肢缺血,观察EPC、HIF-1α转染EPC对大鼠缺血后肢血管新生和肢体成活的影响.方法 制作SD大鼠后肢缺血模型,将动物随机分为3组,每组6只.将构建的HIF-1α基因真核表达载体转染入EPCs后通过尾静脉注射入大鼠体内,并与注射磷酸盐缓冲液(PBS)或EPC的大鼠进行比较,观察转染HIF-1α对新生血管形成的影响.结果 (1)EPC组、HIF组较PBS组肢体恢复率明显增加(P<0.05),EPC组肢体恢复率较HIF组差(P<0.05).(2)与PBS组比较,各时间点中EPC、HIF组微血管密度(MVD)均明显增多(P<0.05),HIF组较EPC组明显增高(P<0.05).(3)HIF组的HIF与血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达较PBS组、EPC组明显增多(P<0.05).PBS组Capase-3的表达较EPC组、HIF组明显增多(P<0.05).(4)术后7 d,各组的大鼠肢体灌注均明显降低,但EPC、HIF组细胞的血流灌注较PBS组多(P<0.01).术后14、21 d,与PBS对照组比较,HIF组的血流灌注恢复明显(P<0.01),EPC组血流灌注较HIF组少(P<0.05).结论 EPCs对大鼠缺血后肢的局部血管新生有明显促进作用,联合应用HIF-1α和EPCs有更优的治疗效果.     

异丙酚预先给药对缺氧诱导胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡的影响

目的 评价异丙酚预先给经对缺氧诱导胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡的影响.方法 体外分离、培养SD胎鼠的肺泡Ⅱ型上皮细胞,接种于96孔培养板,细胞浓度为1×106/L,每孔180μl,随机分为3组(n=72),正常对照组(C组)常氧培养,缺氧组(H组)和异丙酚-缺氧组(P-H组)缺氧(5%O2)培养,P-H组于缺氧前1 h加入异丙酚(终浓度为5μmol/L).分别于缺氧3、12、24或48 h时测定细胞凋亡率、缺氧诱导因子-1α(HIF-lα)mRNA、Bnip3L mRNA、HIF-lα蛋白和Bnip3L蛋白的表达水平.结果 与C组比较,H组细胞凋亡率升高,HIF-lα mRNA、Bnip3L mRNA及其蛋白表达水平上调(P＜0.05).异丙酚预先给药可抑制缺氧诱导的上述改变(P＜0.05).结论 异丙酚预先给药可抑制缺氧诱导胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡,其机制与抑制HIF-1的激活,从而下调Bnip3L蛋白表达有关.     

针对前列腺癌HIF—1α的2种pSUPER RNAi焦统的构建及鉴定

目的构建2种抑制HIF—1α的siRNA表达载体。方法根据GenBank中HIF—1α序列信息并结合2种pSUPER载体的共同的酶切位点结构,化学合成2对编码短发夹RNA序列的靶向HIF-1α基因的寡核苷酸链,各60个碱基、退火、克隆到经BglⅠ、HindⅢ双酶切的2种pSUPER载体上,获得的2种重组RNAi质粒转化感受态大肠杆菌,挑选阳性克隆,抽取重组质粒,EcoRⅠ、HindⅢ双酶切电泳、测序鉴定,培养前列腺癌PC-3细胞通过Western blot检测2种重组RNAi载体干扰效果。结果将重组构建的2种pSUPER质粒经双酶切电泳分析及插入基因片段进行序列分析,目的基因片段成功插入到设计位点,并且序列完全一致。2种重组质粒可显著降低前列腺癌PC-3细胞蛋白的表达。结论2种重组RNAi载体的成功构建,为进一步研究HIF—1α在前列腺癌发病机理及增殖、转移中的功能奠定了基础,同时可以用于其在其他肿瘤的功能研究。     

缺氧诱导因子-1对肾微血管内皮细胞缺氧再复氧损伤免疫调节作用

目的探讨低氧诱导因子1(HIF1)在肾微血管内皮细胞(HGMECs)缺氧再复氧损伤中的免疫调节作用。方法建立HGMECs缺氧再复氧模型,应用特异性脯氨酰羟化酶抑制剂3,4DHB和环氧酶2阻断药物NS398预处理HGMECs,设对照、缺氧复氧、3,4DHB和NS398四组。采用逆转录聚合酶链反应、免疫印记和酶联免疫吸附试验等方法检测各组细胞HIF1α、血红素氧合酶1(HO1)的mRNA和蛋白的表达及上清中可溶性细胞间黏附因子1(sICAM1)的水平;将各组HGMECs与异体淋巴细胞混合培养(MELR),检测淋巴细胞增殖程度和MELR上清中白细胞介素2(IL2)的表达水平。结果与对照组相比,HGMECs经缺氧复氧损伤后HIF1α蛋白和HO1mRNA表达水平显著增高(P<0.01),上清中sICAM1(14.55±1.13vs7.90±1.61)ng、异体淋巴细胞增殖率(0.191±0.053vs0.069±0.032)和MELR上清中IL2(40.0±5.0vs18.0±3.0)pg水平均有显著增高(P<0.01)。与缺氧复氧组比较,3,4DHB干预组HIF1α蛋白和HO1mRNA表达水平显著增高(P<0.05),而淋巴细胞增殖率(0.079±0.038,P<0.01)及IL2(25.7±6.1pg,P<0.01)和sICAM1(8.71±1.32ng,P<0.01)水平则显著下调。与缺氧复氧组比较,NS398干预组HIF1α蛋白和HO1mRNA表达水平显著减低(P<0.01),而淋巴细胞增殖率(0.268±0.079)及IL2(51.0±11.0)pg和sICAM1(20.33±3.05)ng表达水平则显著增高(P<0.05)。结论缺氧复氧会对HGMECs造成免疫学损伤,HIF1α稳定表达可起到保护性作用。     

c-jun反义基因重组体转染对缺氧复合烧伤血清刺激下大鼠心肌细胞的保护作用

目的 观察c-jun反义基因重组体转染对缺氧复合烧伤血清刺激下大鼠心肌细胞的保护作用。方法 培养大鼠心肌细胞，分为：(1)正常对照组；(2)转染组：构建c-jun反义基因重组体并转染人心肌细胞，随后进行缺氧复合烧伤血清刺激；(3)非转染组：仅进行缺氧复合烧伤血清刺激，不作其他处理。于刺激后l、3、7h，采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测c-jun mRNA的表达变化；用Western blot检测c-jun蛋白、肌钙蛋白T(TnT)和β-微管蛋白的表达变化；在光镜和电镜下观察心肌细胞形态结构改变。结果 (1)与正常对照组比较，非转染组c-jun mRNA与蛋白表达显，转染组较非转染组显下降。(2)与正常对照组比较，非转染组TnT与β-微管蛋白表达显下降，转染组较非转染组明显回升。(3)转染组心肌细胞骨架结构基本保持完好，偶见断裂与溶解。非转染组骨架网状结构紊乱、溶解与断裂，呈颗粒状。结论 缺氧复合烧伤血清刺激可使大鼠心肌细胞c-jun表达上调，进而引起心肌细胞损伤，c-jun反义基因重组体转染对该刺激条件下的心肌细胞具有保护作用。     

反义缺氧诱导因子-1α对胰腺癌细胞BxPC-3化疗敏感性的影响

目的： 观察反义缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)对胰腺癌细胞BxPC-3化疗敏感性的影响。方法：实验分组：（1）缺氧条件下(0.5% O2)体外培养4h，未转染反义HIF-1α质粒的BxPC-3细胞设为缺氧对照组；（2）常氧条件下体外培养，未转染反义HIF-1α质粒的BxPC-3 细胞设为常氧对照组；（3）缺氧条件下(0.5% O2)体外培养4h，稳定转染反义HIF-1α质粒的BxPC-3细胞设为实验组。采用逆转录聚合酶链反应 (RT-PCR)和免疫印迹(Western Blot)检测各组的HIF-1α和survivin表达情况。 流式细胞术和MTT比色法检测不同剂量的化疗药物(5-氟尿嘧啶、阿霉素、吉西他宾)对各组的凋亡率和生长抑制率的影响。 结果：实验组HIF-1α和survivin的表达明显降低 (P<0.05)，与对照组相比，实验组的凋亡率、抑制率与剂量成正比，高剂量引起高抑制(P<0.05)。 结论：反义HIF-1α可能通过阻断survivin的表达而增强胰腺癌对化疗的敏感性。据此可望通过阻断HIF-1α的表达为胰腺癌基因治疗提供一种新途径。     

短发夹状RNA抑制缺氧诱导因子1α在前列腺癌细胞中的表达

目的:构建产生缺氧诱导因子1α(HIF-1α)特异性短发夹状RNA(shRNA)的载体并检测其抑制作用,探讨该技术在前列腺癌治疗中的应用前景。方法:设计、合成针对HIF-1α的特异性shRNA模板序列,将其插入含有U6启动子的psilencerTM2.1-U6载体中,得到shRNA表达载体psilencer-HIF,在脂质体介导下转染前列腺癌细胞株PC-3M,应用绿色荧光蛋白质粒pEGFP共转染评价转染效率,RT-PCR及Western印迹检测其对HIF-1α表达的影响。结果:重组质粒psilencer-HIF经测序分析证实与设计的完全一致,共转染24 h后质粒转染效率为(89.26±4.72)%,其产生的shRNA在PC-3M细胞中能诱导RNA干扰(RNAi),转染后48 h HIF-1αmRNA和蛋白水平分别下降82.09%和81.61%(P<0.01);而阴性对照组HIF-1α表达水平无明显改变(P>0.05)。结论:成功构建了HIF-1α基因shRNA表达质粒,其可有效抑制前列腺癌细胞中的HIF-1α的表达,为前列腺癌的基因治疗提供了新思路。     

黄芩苷对缺氧缺血性新生鼠脑缺氧诱导因子-1α的影响

目的　研究黄芩苷 (BC)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤 (HIBD )时缺氧诱导因子 (HIF) 1αmRNA、半胱天冬酶 (Caspase) 3及脑细胞凋亡的影响。 方法　新生 7日龄SD大鼠随机分为假手术组 (n =12 )、缺氧缺血组 (HIBD组 ,n =15 )、黄芩苷治疗组 (BC组 ,n =13 )。BC组在HIBD后当日起给予BC 0 .12mg/g腹腔注射 ,每日 1次 ,共 7d。观察大鼠体重增长率、左右脑重比值及脑组织病理形态学 ;采用末端脱氧核苷酸介导的X DUTP缺口末端标记 (TUNEL)法检测脑细胞凋亡 ;采用定量逆转录 多聚酶链反应 (RT PCR)法检测鼠脑HIF 1αmRNA ;采用免疫组织化学法检测鼠脑Caspase 3蛋白。 结果　BC组体重增长率与HIBD组比较差异无统计学意义 (P >0 .0 5 ) ,BC组左右脑重比值较HIBD组明显增加、脑神经元坏死较HIBD组减轻 ,脑细胞凋亡数较HIBD组减少。BC组鼠脑HIF 1α基因的表达较HIBD组减弱。BC组Caspase 3阳性细胞数较HIBD组减少。结论　BC可减轻HIBD ,减弱HIF 1αmRNA及Caspase 3表达 ,减少脑细胞凋亡。     

RNA干扰对前列腺癌PC-3细胞血管内皮生长因子表达的研究

目的:构建前列腺癌血管内皮生长因子(VEGF)RNA干扰(RNAi)真核表达载体,并研究RNAi对前列腺癌VEGF表达的影响。方法:合成VEGFRNAi片段,将RNAi片段定向克隆于RNAi表达载体,测序鉴定;RNAi表达载体转染人前列腺癌PC-3细胞,Western印迹法检测VEGFRNAi表达载体对VEGF蛋白表达的影响,MTT法检测转染VEGFRNAi表达载体对细胞生长的抑制作用。结果:成功构建VEGFRNAi真核表达载体;VEGFRNAi组VEGF蛋白的表达明显降低,显著低于空载体组和未转染的对照组;前列腺癌PC-3细胞24、48、72h的生长抑制率分别为23.5%、33.5%、40.8%。结论:VEGFRNAi可以抑制前列腺癌PC-3细胞蛋白的表达和抑制细胞生长,为前列腺癌的生物治疗提供一定的实验基础。