金黄色葡萄球菌耐消毒剂基因qacA/B检测

金黄色葡萄球菌是临床最重要的致病菌之一，特别是其多重耐药性已引起临床广泛重视，同时各种季铵类、醛类、含氯类消毒剂的广泛应用，造成了金黄色葡萄球菌耐消毒剂菌株在院内的广泛流行。为了解本地金黄色葡萄球菌对抗生素的耐药性和对季铵类消毒剂的耐药性，我们应用聚合酶链（PCR）法测定了100株金黄色葡萄球菌的耐消毒剂基因qacA／B和β-内酰胺类耐药基因（编码青霉素结合蛋白PBP2a）mecA，并分析了耐消毒剂基因qacA／B与mecA的相关性，现将结果报告如下。     

临床分离的金黄色葡萄球菌mecA和qacA/B基因检测

目的了解临床分离的金黄色葡萄球菌对常用抗菌药物的耐药性及mecA基因和qacA/B基因携带现状。方法收集临床分离的111株金黄色葡萄球菌,采用K-B药敏纸片法检测其对抗菌药物的耐药性,用聚合酶链反应检测mecA和qacA/B基因。结果 111株金黄色葡萄球菌对青霉素G、氨苄西林、红霉素和苯唑西林的耐药率较高,分别为97.3%、93.4%、86.5%和82.9%,对万古霉素和替考拉宁均敏感;mecA基因和qacA/B基因的检出率分别为63.9%和13.5%;将部分菌株的mecA和qacA/B基因扩增产物进行测序,并将测序结果登录NCBI进行比对。结论临床分离的金黄色葡萄球菌mecA基因检出率较高且呈多药耐药趋势;大部分MRSA和少部分MSSA中携带消毒剂抵抗基因qacA/B;临床应重视由此类金黄色葡萄球菌所引起的感染的诊断、治疗和医院感染的控制,并合理使用消毒剂。     

临床与环境中分离菌株的耐消毒剂基因 qacA/B和qacE△1-sull检测

目的 了解临床与环境中分离菌株中耐消毒剂基因的携带情况，为进一步改良现有的消毒剂或消毒方法提供依据。方法 收集从临床及环境中分离的菌总计168株，用PCR法检测耐消毒剂基因qacA／B及qacE△1-sull。结果 在临床分离的115株菌中，qacE△1-sull基因检出率58．3％（67／115），qacA／B基因检出率20．0％（23／115）。其中39株不动杆菌检到qacE△1-sull基因35株，阳性率89．7％；检测到qacA／B基因4株，阳性率10．3％；25株耐甲氧西林葡萄球菌（MRS），两种基因的检出率分别为12．0％（3／25）、68．0％（17／25）。在环境中分离的53株菌中，qacE△1-sull基因检出率17．0％（9／53），qacA／B基因检出率11．3％（6／53）。其中15株不动杆菌两种基因检出分别为：5和2株；16株葡萄球菌两种基因检出为：3株。结论 临床与环境分离的菌株中均检测到耐消毒剂基因，其中临床菌株的检出率高于环境菌株。革兰阴性杆菌携带qacE△1-sull基因为主，革兰阳性球菌携带qacA／B基因为主。     

临床与环境中分离菌株的耐消毒剂基因qacA/B和qacEΔ1-sull检测

目的了解临床与环境中分离菌株中耐消毒剂基因的携带情况,为进一步改良现有的消毒剂或消毒方法提供依据。方法收集从临床及环境中分离的菌总计168株,用PCR法检测耐消毒剂基因qacA/B及qacEΔ1-sull。结果在临床分离的115株菌中,qacEΔ1-sull基因检出率58.3%(67/115),qacA/B基因检出率20.0%(23/115)。其中39株不动杆菌检到qacEΔ1-sull基因35株,阳性率89.7%;检测到qacA/B基因4株,阳性率10.3%;25株耐甲氧西林葡萄球菌(MRS),两种基因的检出率分别为12.0%(3/25)、68.0%(17/25)。在环境中分离的53株菌中,qacEΔ1-sull基因检出率17.0%(9/53),qacA/B基因检出率11.3%(6/53)。其中15株不动杆菌两种基因检出分别为:5和2株;16株葡萄球菌两种基因检出为:3株。结论临床与环境分离的菌株中均检测到耐消毒剂基因,其中临床菌株的检出率高于环境菌株。革兰阴性杆菌携带qacEΔ1-sull基因为主,革兰阳性球菌携带qacA/B基因为主。     

多重聚合酶链反应检测儿童常见下呼吸道感染细菌

目的 探讨多重聚合酶链反应(PCR)检测儿童急性下呼吸道感染细菌的应用价值.方法 对383例急性下呼吸道感染患儿的深部呼吸道吸引物进行细菌培养及多重PCR检测,检测肺炎链球菌、流感嗜血菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、嗜肺军团菌、铜绿假单胞菌等9种病原菌.结果 细菌培养的总检出率为42.04％,多重PCR检出率45.95％,两者差异无统计学意义;以细菌培养为标准,多重PCR检测的总敏感性为77.02％,特异性为76.58％,其中大肠埃希菌和表皮葡萄球菌的检出率明显高于培养法.结论 多重PCR检测可作为下呼吸道致病菌快速检测的有用工具.     

逆转录-聚合酶链反应检测风疹病毒基因

针对风疹患者发病早期血清中特异性风疹IgM抗体阳性率低的特点 ,以及对胎儿风疹病毒感染检测的需要 ,采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)直接从风疹减毒活疫苗BRDⅡ株、风疹GOS株、临床风疹患者的含漱液和咽拭子中检测出 411bp特异性片段 ;而麻疹、流行性腮腺炎、流行性感冒病毒均未检测出相应片段。通过对RT PCR一次产物的再次扩增 ,可以使检测的灵敏度达到 0 1TCID50 。该技术可作为风疹酶联免疫吸附试验 (ELISA)的一种补充 ,同时对控制先天性风疹综合征与优生优育工作具有积极的作用。     

聚合酶链反应扩增弓形虫B1基因检测孕妇弓形虫感染

用聚合酶链反应技术扩增弓形虫Ｂ１基因特定序列，对１７２６例孕妇外周血作弓形虫检测。结果：扩增产物琼脂糖凝胶电泳分析示片段长度为１９４ｂｐ，经Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交鉴定其系靶序列，孕妇外周血弓形虫检出阳性率为１．０４％。提示：Ｂ１基因扩增是诊断弓形虫病的有效方法。孕妇弓形虫感染状况应引起重视。     

某三甲医院耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌耐药性和耐消毒剂基因分析

目的 了解耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)临床分离菌株的耐药特征,检测分析耐消毒剂基因携带情况。方法 收集兰州大学第一医院2021年1-12月临床送检的住院患者包括痰、血及胸腹水等各类标本,共获得不重复菌株210株,进行菌株鉴定及药敏试验;聚合酶链反应(PCR)方法检测耐消毒剂基因携带情况。结果 210株CRE菌株主要为肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌,分别占64.29%(135/210)和22.86%(48/210);科室分布主要为重症监护病房46.67%(98/210);标本来源主要为痰49.52%(104/210)、血液12.86%(27/210)、分泌物9.52%(20/210);210株CRE菌株耐药率最低的抗菌药物是阿米卡星(49.52%);对庆大霉素、四环素、左氧氟沙星、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶、氨曲南和厄他培南的耐药率分别为67.62%、72.38%、83.33%、75.71%、84.76%和98.10%,对其余抗菌药物的耐药率均高达100.00%。210株临床分离的CRE均未检出qacA、qacC、qacJ基因,检出qacB、qacG、qacH、qacE、qacE△1和qacE...     

医院感染患者临床分离细菌耐消毒剂基因的检测分析

目的 检测医院感染后临床分离的细菌耐消毒剂基因qacE-sull存在情况.方法 采用聚合酶链反应(PCR)技术检测qacE-sull基因.结果 222株细菌qacE-sull基因的检出率为54.5%,其中肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、变形菌属、铜绿假单胞菌,肠球菌属、鲍氏不动杆菌阳性率分别为47.6%、58.3%、57.6%、54.2%、53.6%、53.3%、55.0%.结论 医院感染患者临床分离耐消毒刺基因qacE-sull携带率较高,细菌携带qacE-sull基因可能是引起医院感染的重要原因,应引起我国医院消毒界的重视.     

多重聚合酶链反应方法检测艰难梭菌毒素基因研究

目的探讨同时检测艰难梭菌毒素A、B基因和二元毒素基因的多重聚合酶链反应(PCR)方法。方法收集2014年1-9月医院120例住院腹泻患者的粪便标本,用艰难梭菌选择性培养基CCFA分离培养艰难梭菌;采用法国生物梅里埃公司厌氧菌鉴定试剂盒鉴定;采用酶免夹心与终点荧光检测相结合技术(ELFA),检测艰难梭菌毒素A、B基因,并分析其毒素特征;将艰难梭菌纯培养出的菌落用多重PCR方法测定艰难梭菌的毒素A、B基因和二元毒素基因。结果 120例腹泻患者送检粪便标本中,分离培养出19株艰难梭菌,艰难梭菌分离率达15.8%;应用免疫学方法检测毒素检出率为52.63%;用多重PCR方法艰难梭菌A、B毒素基因检出率为94.7%;15例患者送检粪便标本检测艰难梭菌A、B毒素阳性中,10株分离培养并鉴定出艰难梭菌;105例患者送检粪便标本检测艰难梭菌A、B毒素阴性中,有9例分离培养并鉴定出艰难梭菌。结论利用多重PCR检测艰难梭菌毒素A、B基因和二元毒素基因,较传统的免疫学方法敏感性高,能够准确地区分艰难梭菌毒素基因的类型,多重PCR是一种快速、特异的一步筛选艰难梭菌毒素基因的方法。     

军团菌rcp毒力基因的聚合酶链反应检测方法研究

目的 建立军团菌rcp毒力基因聚合酶链反应(PCR)检测方法.方法 根据GenBanK公布的嗜肺军团菌核苷酸序列合成军团菌rcp毒力基因的特异引物,采用PCR方法对2005年-2007年天津市中央空调冷却塔分离的16株嗜肺军团菌、杜氏军团菌(Legionella dumoffii,L.dum)、博氏军团菌(Legionella bozemanii,L.boz)、长滩军团菌(Legionellafeeleii,L.fee)等菌株进行了军团菌毒力基因rcp的检测.结果 3株嗜肺军团菌扩增出了900 bp的rcp基因片段,其余菌株未扩增出该基因片段.结论 本研究建立的军团菌毒力基因rcp的PCR检测方法具有较高的特异性和敏感性,适于军团菌毒力基因的深入研究.

Abstract：

Objective To establish a polymerase chain reaction method for the detection of the rcp virulence gene of L. pneumophila. Methods Sixteen strains of Legionella pneumophila, L. dumiffii, L. bozemanii and L. Longbeachae isolated from the cooling towers of the centralized air-conditioning systems in Tianjin form 2005 to 2007 were detected by polymerase chain reaction method using L. pneumophila rcp virulence gene-specific primer according to GenBank published nucleotide sequence. Results The 900 bp rcp genetic fragment was amplified in three strains of L. pneumophila, while others not. Conclusion The rcp virulence gene-based polymerase chain reaction method for the detection of L. pneumophila has been successfully established and is the foundation for the studies of Legionella virulence.     

嗜肺军团菌聚合酶链反应检测方法及其应用研究

根据嗜肺军团菌基因组ＤＮＡ的种特异性ＤＮＡ片段序列，合成一对引物进行聚合酶链反应（ＰＣＲ）。经琼脂糖凝胶电泳、ＥＢ染色结果表明，一条８７０ｂｐ的核苷酸区带为嗜肺军团菌１～１４血清型菌株所共有。ＰＣＲ检测水中军团菌，其敏感性为３５０ｃｆｕ／ｍｌ，而用同位素标记探针、斑点杂交法检测，其敏感性为４３ｃｆｕ／ｍｌ。ＰＣＲ检测人工感染嗜肺军团菌的豚鼠组织标本，阳性率为８３．３％，而细菌分离培养的阳性率仅为２６．６％。在现场调查中，用ＰＣＲ法初步验证了一起由Ｌｐ１０引起的军团菌病爆发。上述结果表明，ＰＣＲ法能快速、敏感、特异性检测嗜肺军团菌感染。     

定量聚合酶链反应检测血清乙型肝炎病毒DNA及其意义

采用定量ＰＣＲ技术检测了１４０例病毒性肝炎患者及３１例ＨＢｓＡｇ携带者血清乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ基因含量。结果显示１２３例乙型肝炎患者及３１例ＨＢｓＡｇ携带者血清ＨＢＶＤＮＡ基因含量范围在１０１至１０９拷贝／微升，１７例其它类型肝炎及３０例健康正常人均未检出ＨＢＶＤＮＡ；与定性ＰＣＲ及分子斑点杂交检测比较，定量ＰＣＲ的灵敏度更高。该方法是一种快速、敏感、特异的定量ＰＣＲ技术，可用于乙型肝炎的临床诊断和实验研究。     

应用PCR法检测沙门菌

目的 研究沙门菌的PCR检测方法.方法 引物选择沙门菌的hilA基因,应用PCR法检测沙门菌.结果 PCR能检测经选择性增菌液培养的沙门菌,扩增片段在497 bp.结论 应用PCR检测沙门菌,具有快速、特异、灵敏和简便的特点.     

应用PCR法检测副溶血性弧菌

目的 研究副溶血性弧菌的PCR检测方法。方法 引物选择副溶血性弧菌耐热溶血素（TDH）上的基因，应用PCR法，检测副溶血性弧菌。结果 PCR能检测经选择性增菌液培养的副溶血性弧菌，扩增片段在430bp：结论 应用PCR检测副溶血性弧菌，具有快速、特异、灵敏和简便的特点。     

套式PCR法检测肺炎克雷伯菌染色体介导β-内酰胺酶基因

目的 了解国内肺炎克雷伯菌连续分离株SHV、LEN、OKP3个基因家族存在情况。方法 应用套式聚合酶链反应（nPCR）法对耐药的肺炎克雷伯菌进行SHV、LEN、OKP基因检测与分析。结果 44株中SHV基因阳性28株（63．6％），LEN基因阳性4株（9．1％），无OKP基因检出。结论 SHV、LEN、OKP3个基因家族主要由染色体介导，三者的同源性80％～92％，它们在细菌耐药性播散过程中起非常重要的作用，nPCR是检出染色体介导β-内酰胺酶基因的实用简便的方法。     

细菌性脑膜炎多重聚合酶链反应检测方法的研究

目的建立8种细菌性脑膜炎多重聚合酶链反应(Multiplex-polymerase Chain Reaction M-PCR)检测方法。方法针对脑膜炎奈瑟菌、流行性感冒嗜血杆菌、肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生性李斯特菌、猪链球菌、结核杆菌、新生隐球菌的种特异性基因,通过优化单一PCR扩增体系及扩增程序,建立M-PCR方法检测8种导致细菌性脑膜炎的病原体,检测M-PCR体系的灵敏度。结果初步建立了检测8种导致细菌性脑膜炎病原体的M-PCR扩增方法,能够同时检测多种导致细菌性脑膜炎的病原。结论M-PCR方法较常规的分离培养鉴定方法具有较高的灵敏度和检测快速的特点,适合临床疑似细菌性脑膜炎感染病例的检测及筛查,提高临床细菌性感染脑膜炎病例的诊断阳性率。     

聚合酶链反应直接检测粪便中脊髓灰质炎病毒RNA的研究

用聚合酶链反应技术检测１９分急性弛缓性麻痹患者的粪便中脊髓灰质炎病毒，其中１１份阳性，与中和试验鉴定及单克隆抗体鉴定结果符合率为９０．９０％￣１００％。该法不仅简便，敏感，特异分型，而且可作型内鉴别，为环境样品中脊灰病毒污染提供了检测手术。     

PCR技术检测尿中人巨细胞病毒的方法学研究

应用ＨＣＭＶ早、晚期两对ＤＮＡ引物，建立了聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测尿中人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）的方法。肾移植术后ＨＣＭＶ感染的临床尿样检测结果表明，该方法具有快速、特异性强、灵敏度高等优点，与血清ＨＣＭＶ－ＩｇＭ检测结果符合率为８３．３％。使用早、晚期基因组的双引物分别对临床尿样进行ＰＣＲ扩增，减少了由于自然点突变所致的假阴性，且引物与ＨＣＭＶ同属其它病毒及组织ＤＮＡ间无交叉反应；以ＨＣＭＶ组织培养液作模板，灵敏度可达６２５ｆｇ。本方法为诊断肾移植受者ＨＣＭＶ感染提供了新的手段，适于临床推广。     

逆转录酶——聚合酶链反应检测肠道病毒

建立一种特异、敏感的检测肠道病毒的逆转录酶—聚合酶链(RT—PCR)方法。在肠道病毒RNA高度保守的5’端非编码区设计、选择、合成三对引物,采用RT—PCR对175株已知肠遭病毒和23份粪便标本进行检测。三对引物RT—PCR均显示高度特异性、敏感性。对23份粪便标本检测,E_1E_2引物有9份阳性,C_1C_2引物为7份阳性,P_1P_2均为阴性,与常规检测结果基本一致。这一检测方法具有较高特异性和敏感性,可用于临床快速检测肠遭病毒。