大鼠乳腺肿瘤线粒体细胞色素b基因突变

目的 了解大鼠乳腺癌组织、癌旁组织和正常组织的线粒体细胞色素ｂ基因变异,６方法 提取细胞总ＤＮＡ,用ＰＣＲ法扩增细胞色素ｂ基因,产物用ＤＮＡ自动测序法进行序列分析。结果 癌组织发生了ｎｔ １４９３１Ｃ→Ｇ,ｎｔ１５００４Ｃ→Ｇ和ｎｔ １５４３５ Ｔ→Ｃ３处点突变。癌旁组织发生了ｎｔ１５４３６Ａ→Ｃ突变,正常组织没有突变。结论 大鼠乳腺癌组织和癌旁组织线粒体细胞色素ｂ基因存在突变。     

乳腺癌中线粒体基因突变的研究进展

乳腺癌组织中mtDNA的突变：Tan等人使用时相温度凝胶电泳和直接DNA测序对19例病人的正常和肿瘤相对照检测突变。体细胞突变率为74％（14／19），大部分突变（81．5％）局限于D-loop区域。然而在16SrRNA，ND2，和ATPase6基因位点也可以检测到突变。另一项研究显示，对18例原发性乳腺癌病人行细针穿刺采样本和对应的白细胞一起进行分析。正如在前面的研究中所观察到的大部分病人检测到体细胞突变而且鉴定的大部分突变都是位于D-loop区域。     

氰化钾对人精子线粒体细胞色素氧化酶作用的研究

目的了解氰化钾(KCN)对人精子线粒体内细胞色素氧化酶的阻断作用。方法用不同浓度的KCN作用于活力正常的精子,阻断精子内细胞色素氧化酶的活性,观察其活性被阻断的情况。结果低至8.3×10-3mol／L的KCN即可完全阻断精子内的细胞色素氧化酶。结论实验结果提示,8.3×10-3mol／L的KCN可能是阻断精子线粒体内细胞色素氧化酶活性的最低浓度。     

小鼠脑组织细胞色素Ｃ氧化酶活性、线粒体细胞色素含量与年龄关系

目的：研究小鼠脑细胞色素C氧化酶（Cytochrome C oxidase,CCO）活性、线粒体细胞色素C（Cytochrome C,Cyt C）含量与年龄的关系,为法医学年龄推断提供新的思路。方法：利用紫外分光光度法检测了1、3、6、9、12月龄昆明小鼠的脑组织CCO活性及线粒体Cyt C含量。结果：小鼠脑组织CCO活性、线粒体Cyt C含量,随着年龄增大而逐渐降低。结论：脑组织CCO活性及线粒体Cyt C含量有望用于年龄推断。     

郑州地区4种尸食性苍蝇线粒体DNA中细胞色素氧化酶亚基基因序列检测

目的：通过检测尸食性苍蝇线粒体DNA（mtDNA）中细胞色素氧化酶亚基（COⅠ）中305bp基因序列，鉴定尸食性苍蝇的种类，解决依据形态学不能鉴定苍蝇幼虫种类的难题。方法：随机采集郑州市区、郊区等不同放置地点的实验动物尸体上的2科4种共17个苍蝇的成虫、蛹、卵为样本，提取上述样本的mtDNA进行PCR扩增，产物检测与纯化、正反双向测序，并使用相关软件进行序列拼接、比对及进化距离分析，并构建种内和种间的系统发育树。结果：种内进化分歧均数小于1％，种间进化分歧均数大于1％，具有统计学意义。结论：尸食性苍蝇mtDNA中COⅠ序列分析能有效地对尸食性苍蝇的种类进行鉴定，该方法简便、快捷、准确，可作为法医鉴别尸食性苍蝇种类的可靠依据。     

微波对大鼠脑线粒体细胞色素C氧化酶亚基转录水平的影响

目的 观察微波辐照对大鼠大脑皮层和海马组织线粒体编码基因COX I和核编码基因COXⅣmRNA表达水平的影响，探讨微波辐照是否影响线粒体能量代谢。方法 平均功牢密度为3mW／cm^3和30mW／cm^2微波急性辐照大鼠1h后，应用RT-PCR检测大鼠大脑皮层和海马组织COXI和COXⅣ基因转录水平的变化。结果 3mW／cm^2微波辐照后0、3、24h，大鼠脑海马和大恼皮层COXI、COXⅣ mRNA表达无显著变化。30mW/cm^2微波辐照后0、3、24h，大鼠脑海马和大恼皮层COXI mRNA表达均明显降低，而COXⅣ mRNA表达无显著变化。结论 微波辐照下调大鼠大脑皮层和海马线粒体编码基因COXI mRNA表达，并存在剂量依赖关系，表明微波辐照可能会引起线粒体能量代谢障碍。     

过氧化氢导致线粒体DNA编码细胞色素C氧化酶基因突变与其编码蛋白结构与功能关系的研究

目的探讨过氧化氢(H2O2)导致线粒体DNA(mtDNA)编码细胞色素C氧化酶(COX)基因损伤(突变)后对其编码蛋白结构与功能的影响及两者之间的关系.方法采用生物信息学技术,运用计算机同源模建的方法模拟人天然COX亚单位和其突变体的空间结构,并利用已有的实验数据,结合模建的结果进行了结构、功能的分析、研究.结果在COX Ⅰ的三维结构中突变的部位(残基297～306)位于分子的最外部,而该区域参与了与B亚基(相当于COXⅡ亚基)的作用,该部位的突变使突变部位附近残基的侧链结构环境发生了极大的变化,导致附近的电荷性质、亲疏水性质和空间特性出现变化,这些变化对酶复合物的形成有直接的影响;COXⅡ突变后,组成分子结构的"椅靠"部分和"椅面"部分之间的夹角略有增大,而"椅靠"和"椅面"之间的夹角的变化将会影响整个酶分子的稳定性.结论H2O2导致的mtDNA编码COX Ⅰ、COXⅡ亚基基因突变使其编码的COX蛋白空间结构发生改变,这种改变是其功能改变(如酶蛋白活性下降)的主要原因.     

胃癌线粒体DNA D-loop区碱基突变的检测分析

目的 研究胃癌患者的癌组织线粒体DNA （mtDNA）D-loop区碱基突变情况,以探讨mtDNA D-loop区碱基突变与胃癌发生发展的相关性.方法 采用聚合酶链反应和DNA测序相结合的方法,对75例胃癌患者癌组织线粒体D-loop 区进行扩增并测序分析.结果 在75例胃癌组织中共有130个位点发生了变化,其中属于基因多态性有101个,基因突变有29个.75例胃癌组织中39例mtDNA D-loop区存在突变,突变率为52%.结论 mtDNA D-loop 区碱基突变可能在胃癌发生发展中发挥重要作用.     

细胞色素氧化酶P4504B1基因突变与膀胱癌遗传易感性的关系

目的:探讨细胞色素氧化酶P450(CYP)4B1基因突变与膀胱癌遗传易感性的关系。方法:应用PCR-单链构象多态性(PCR-SSCP)分析和直接测序分析,分别检测152例膀胱癌患者和150例非肿瘤同期住院患者CYP4B1的各个常见突变基因位点,分析基因突变对膀胱癌发病的影响。结果:膀胱癌组CYP4B1 C517T、AT881-882del+G993A+C1018T和C1123T突变基因型频率高于对照组(χ2=8.266、16.218和15.347,P<0.05);不同病理分级及临床分期膀胱癌患者间CYP4B1各突变基因型频率差异无统计学意义(P>0.05)。结论:携带CYP4B1C517T、AT881-882del+G993A+C1018T和C1123T突变基因型者更易患膀胱肿瘤。     

耗竭运动时线粒体心磷脂含量和细胞色素C氧化酶活性的改变

本实验结果显示,大鼠耗竭游泳时,心肌和股四头肌线粒体脂质过氧化水平升高,心磷脂含量下降,并同时测定到细胞色素C氧化酶活性的降低。     

大鼠肝、肾细胞色素氧化酶亚单位的分离

细胞色素氧化酶是真核生物细胞呼吸链终末氧化酶,是生物体内能量生成的重要步骤。本文利用高分辨率的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离了大鼠肝、肾细胞色素氧化酶的亚单位组分。     

肺细胞色素氧化酶体视学测量法与高压氧研究

采用超微结构细胞化学方法,用计算机图象分析仪测量计算了小鼠肺毛细血管和Ⅱ型肺泡线粒体、线粒体膜和嵴上细胞色素氧化酶活性变化的二维形态学、三维立体学定量参数.结果表明,毛细血管线粒体面积较Ⅱ型肺泡细胞小,但体密度大;毛细血管线粒体细胞色素氧化酶阳性反应面积比Ⅱ型肺泡细胞小,但酶反应体密度大.暴露于高压氧(0.5MPa)后小鼠Ⅱ型肺泡细胞线粒体细胞色素氧化酶活性降低.     

颞叶癫痫大鼠海马线粒体细胞色素氧化酶亚基Ⅲ和Ⅳ表达的变化

目的:探讨癫痫对大鼠海马线粒体细胞色素氧化酶（COX）的mtDNA和nDNA编码亚基Ⅲ、Ⅳ表达的影响。方法:将成年雄性Wistar大鼠40只随机分为生理盐水对照组,癫痫持续状态（SE）后急性期（3h）、静止期（7d）、慢性期（45d）组和注射匹鲁卡品（PILO）但未出现SE组,每组8只。荧光实时定量PCR和Western blot分别检测海马线粒体COX Ⅲ、Ⅳ mRNA和蛋白的表达。结果: COX Ⅲ mRNA和蛋白在SE后3h表达明显升高(P<0.001, P<0.01),7d时降到对照水平,45d显著降低(P<0.001, P<0.01);COX Ⅳ mRNA和蛋白在3h时表达较对照组升高,但差异无统计学意义（P＞0.05),7d和45d时下降至对照水平。注射PILO但无SE组与对照组结果类似。结论: 颞叶癫痫海马cox功能紊乱与痫性发作相关,线粒体编码的基因更易受痫性发作的影响。     

缺氧对成年和新生大鼠大脑皮质细胞色素氧化酶的影响

目的 :探讨缺氧时成年与新生大鼠大脑皮质神经元超微结构和细胞色素氧化酶的活性变化。方法 :用光学显微镜观察成年与新生大鼠大脑皮质的形态变化 ,用电子显微镜观察其大鼠大脑皮质神经元的超微结构改变。用细胞化学方法显示细胞色素氧化酶反应产物在神经元内的分布。结果 :缺氧导致新生大鼠神经元线粒体损伤与细胞色素氧化酶活性减弱。结论 :缺氧 1 5h ,新生大鼠大脑皮质神经元线粒体的破坏、内质网的扩张和细胞色素氧化酶活性减弱均较成年大鼠明显     

吗啡依赖大鼠脑细胞色素C氧化酶活性的改变

探讨吗啡依赖大鼠脑线粒体细胞色素Ｃ氧化酶活性的变化。方法；采用药参食法培养大鼠吗啡模型，通过差速离心法分离线粒体。采用分光不镀及化学发乐等方法测定ＣＯＸ活性，心磷脂含量，膜流动性，超氧化物歧化酶活性及丙二醛含量。ＣＯＸ活性，ＣＬ含量，ＭＦ及ＳＯＤ活性都明显降低，ＭＤＡ含量明显升高。结论：吗啡依赖大鼠脑线粒体ＣＯＸ活性降低，这与ＳＯＤ活性降低导致的脂这氧化水平升高有关。     

肝硬化大鼠胃窦平滑肌细胞色素氧化酶Ⅱ基因及线粒体膜电位的变化

目的研究肝硬化大鼠胃窦平滑肌细胞色素氧化酶Ⅱ基因（COⅡ gene）及线粒体膜电位的变化，探讨肝硬化胃动力障碍机制。方法20只Wister大鼠随机分为肝硬化组和对照组，采用葡聚糖蓝-2000为胃肠内标记物观察胃动力的变化，RT-PCR法检测胃窦平滑肌COⅡ mRNA的变化，激光共聚焦显微镜检测线粒体膜电位的改变。结果与对照组比较，肝硬化组胃动力明显减弱（P〈0．01），胃窦平滑肌COⅡ mRNA的表达及线粒体膜电位均显著低于对照组（P〈0．01）。结论肝硬化大鼠胃运动功能减退与胃窦平滑肌COⅡ mRNA的表达下降及线粒体膜电位的降低有关。     

貂组织线粒体DNA及细胞色素b鉴定及特征

目的:探讨貂组织线粒体DNA（mtDNA）及细胞色素b(Cytb)的特征。方法:采用碱变性方法提取新鲜的貂心及肝组织中mtDNA,PCR技术扩增细胞色素b(Cytb)基因部分序列片段并直接测序。结果:新鲜的貂心和肝组织提取出16 800 bp的mtDNA,并能扩增出310 bp大小的Cytb基因,测序结果显示貂心Cytb基因与美洲貂(GenBank AB026109.1)同源性为99%。 结论:貂组织含有完整的mtDNA,Cytb部分基因可以作为貂心物种鉴定及检测的分子标记。     

牛心细胞色素C氧化酶的纯化

本文应用硫酸铵分级沉淀、Ｐｈｅｎｙｌ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＣＬ－４Ｂ疏水层析和Ｃｙｔｏｃｒｏｍｅ Ｃ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ亲和层析的方法，从牛心肌中分离纯化了细胞色素Ｃ氧化酶。产品Ｈｅｍｅａ含量为１６．３２ｎｍｏｌ／ｍｇ Ｐｒ，铜原子含量为１５．２４ｎ ａｔｏｍｓ／ｍｇ Ｐｒ。活性实验表明，去脂的细胞色素Ｃ氧化酶活性下降，加入Ｔｗｅｅｎ８０可使活性明显提高，说明疏水环境对酶催化功能有保护作用。