基于TRPV离子通道探讨苗医弩药针疗法治疗膝骨性关节炎的作用机制

目的:观察苗医弩药针疗法对膝骨性关节炎(KOA)模型家兔膝关节滑膜组织瞬时感受器电位香草酸受体(TRPV)通道的影响,探讨苗医弩药针疗法治疗KOA的作用机制。方法:从34只新西兰雄性家兔中随机选取6只作为正常组,其余家兔采用右膝关节腔注射木瓜蛋白酶和L-半胱氨酸混合液的方法建立KOA模型,将造模成功的24只家兔随机分为模型组、弩药针组、皮肤针组和涂抹组,各6只。弩药针组家兔采用苗医弩药针疗法于右膝关节面(以血海、梁丘、阳陵泉、阴陵泉为4点的长方形内)上呈"米"字型滚刺;皮肤针组采用皮肤滚针于右膝关节面进行滚刺;涂抹组以弩药液涂抹右膝关节面。隔日1次,每周3次,连续干预4周。于实验第1、21、28、35、42、49天检测家兔机械刺激的缩足阈值(von Frey阈值)。干预结束后,HE染色法观察家兔右膝关节软骨组织形态学改变;ELISA法检测家兔右膝关节液中白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量;Western blot法和real-time PCR检测家兔右膝关节滑膜组织中TRPV1、TRPV4蛋白和mRNA的相对表达量。结果:与正常组比较,模型组家兔实验第...     

阿魏酸钠联合人参皂苷Rg1镇痛作用及其机制

目的:观察阿魏酸钠(SF)联合人参皂苷Rg1(Rg1)镇痛作用并探讨其作用机制。方法:采用小鼠和大鼠两种动物,将动物分为SF低、中、高剂量组(2.5,5,10 mg·kg-1),Rg1低、中、高剂量组(5,10,20 mg·kg-1),复方(SF和Rg1联合用药)低、中、高剂量组(2.5+5,5+10,10+20)mg·kg-1并设置对照组,ig给药5 d后采用小鼠热板法,小鼠醋酸扭体法,大鼠福尔马林法观察SF和Rg1单用及联合应用的镇痛作用;采用全细胞膜片钳技术观察SF和Rg1单用及联合应用对瞬时感受器电位香草酸亚型1(TRPV1)的影响。结果:55℃热板,0.6%醋酸溶液0.02 mL·g-1,5%福尔马林溶液0.1 mL可致动物出现明显疼痛反应,SF中、高剂量组,Rg1高剂量组,复方低、中、高剂量组对3种疼痛模型均有较好的镇痛作用(P<0.05,P<0.01),且复方效果明显优于SF或Rg1单用(P<0.05,P<0.01);1μmol·L-1辣椒素(CAP)可激活TRPV1产生特异性内向电流,SF,Rg1及复方组对该电流均具有一定的抑制作用,且复方组抑制作用强于SF和Rg1组(P<0.05,P<0.01)。SF,Rg1,复方的IC50及95%置信区间分别为32.4(27.5~38.7),82.6(71.0~98.4),30.6(20.2~41.0)mg·L-1,等效应曲线图显示,SF和Rg1对CAP诱导的TRPV1电流的抑制具有协同效应。结论:SF和Rg1合用具有较好的镇痛作用,对TRPV1的协同抑制作用可能是其机制之一。     

芍药甘草汤及其拆方对超高温环境大鼠心肌、下丘脑TRPV3,TRPV4表达的影响

目的:通过观察芍药甘草汤及其拆方对超高温环境大鼠心肌、下丘脑瞬时感受器电位香草酸受体3(TRPV3)和瞬时感受器电位香草酸受体4(TRPV4)表达的影响,探讨芍药甘草汤及其拆方抗高温的机制。方法:SPF级SD雄性大鼠75只,适应饲养1周后,按体质量随机分为5组,分别为常温正常组,高温正常组,芍药甘草汤组(2. 16 g·kg~(-1)),单味白芍组(1. 08 g·kg~(-1))和单味甘草组(1. 08 g·kg~(-1)),除常温正常组外,均饲养于人工气候箱,各给药组按相应剂量连续给药13 d,常温正常组和高温正常组均给予同体积的纯净水;通过蛋白免疫印迹法(Western blot)和实时荧光定量聚合酶链式反应(Realtime PCR)测定各组心肌、下丘脑TRPV3,TRPV4蛋白和m RNA的表达情况。结果:与常温正常组比较,高温正常组大鼠心肌TRPV3蛋白表达显著上升(P 0. 01);心肌TRPV4 m RNA表达明显下降(P 0. 05);下丘脑TRPV3蛋白表达显著上升(P 0. 01);下丘脑TRPV3 m RNA表达明显下降(P 0. 05)。与高温正常组比较,单味白芍组大鼠心肌TRPV3,TRPV4蛋白表达显著下降(P 0. 01);芍药甘草汤组与单味甘草组大鼠心肌TRPV4蛋白表达明显下降(P 0. 05);单味白芍组大鼠心肌TRPV4m RNA表达明显上升(P 0. 05)。结论:大鼠心肌、下丘脑TRPV3,TRPV4通道在高温环境下被激活,芍药甘草汤及其拆方抗高温机制与调节大鼠心肌、下丘脑TRPV3,TRPV4通道蛋白及m RNA表达有关。     

加味九分散对痛风性关节炎大鼠TRPV1表达的影响

目的 通过观察加味九分散对痛风性关节炎大鼠瞬时电位感受器香草酸受体1(TRPV1)表达的影响,探讨加味九分散的止痛机制.方法 将SD雄性大鼠随机分为4组:空白对照组、模型组、扶他林乳胶剂组、加味九分散外敷组.模型组、扶他林乳胶剂组和加味九分散外敷组造痛风性关节炎模型.扶他林乳胶剂组合加味九分散组给药48 h后取大鼠关节...     

电针对大鼠肠易激综合征及 抑郁情绪的改善作用及机制研究

目的： 观察中医针刺疗法中电针“天枢”“上巨虚”方法改善肠易激综合征（IBS）伴抑郁症的作用以及对该模型大鼠结肠组织中瞬时受体电位香草酸亚型 1（TRPV1）、酪氨酸激酶受体A（TrkA）、神经生长因子（NGF）、Rho相关激酶ROCK、Ras同源基因家族蛋白A（RHOA）,海马组织中NFκB和SIRT2蛋白表达的影响,探究针刺改善 IBS-D 肠道功能异常伴抑郁症调控作用的机制。方法： 36只SPF级雄性SD大鼠随机分为健康空白组,模型组,电针组和西药组4组,每组9只。后三组通过二硝基苯磺酸（Dinitrobenzene sulfonate,DNBS）灌肠和慢性束缚应激（Chronic restraint stress）方法建立 IBS 模型。空白组全程正常饲养,无造模干预及治疗。电针组用电针刺激大鼠双侧“天枢”“上巨虚”穴位,疏密波,频率2Hz/100Hz,每次20min。 西药组用匹维溴铵混悬液（18mg/kg）灌胃处理,分别持续7天,每天一次。造模前后及治疗干预后记录各组大鼠粪便含水量、糖水偏嗜程度以及高架十字迷宫测试。ELISA技术检测血清炎症因子的指标。采用免疫组化技术检测大鼠海马组织中NFκB,SIRT2蛋白以及大鼠结肠组织中BDNF,SIRT2,NFκB,CREB蛋白的表达和分布情况,Western Blot技术检测结肠组织中TRPV1、TrkA、NGF、ROCK、RHOA的蛋白表达变化。结果：与空白组比较,造模后大鼠粪便含水量增加（P < 0.01）,糖水消耗减少（P < 0.05）。干预后,与空白组比较,模型组大鼠高架十字迷宫实验的开放臂停留时间百分比减少（P < 0.01）,血清炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β水平增加（P < 0.01）,结肠组织TRPV1、TrkA、NGF、ROCK、RHOA蛋白表达升高,海马组织NFκB阳性表达升高,SIRT2阳性表达降低;与模型组比较,电针组和西药组大鼠粪便含水量减少（P < 0.01/P < 0.05）,开放臂停留时间百分比增加（P < 0.05）,血清炎症因子降低,结肠组织TRPV1、TrkA、NGF、ROCK、RHOA蛋白表达降低,NFκB阳性表达降低,SIRT2阳性表达升高。 结论：电针“天枢”“上巨虚”可有效改善 IBS-D 模型大鼠的胃肠症状,缓解大鼠伴随的抑郁情绪和炎性因子水平,可能是通过降低模型大鼠结肠组织TRPV1、TrkA、NGF、ROCK、RHOA蛋白表达而达到治疗目的的。     

祛风宣肺汤治疗感染后咳嗽动物模型的疗效及相关机制研究

目的:观察祛风宣肺汤对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)引起的感染后咳嗽(postin-fectious cough,PIC)小鼠动物模型咳嗽反射敏感性性和神经源性炎症的治疗作用,并探索可能的机制。方法:雄性的ICR小鼠24只,按数字随机法随机分成空白组、LPS组和中药组。每组8只,通过腹腔注射一定浓度LPS造成小鼠感染后咳嗽的气道高反应性模型,其中中药组并给予中药组祛风宣肺汤灌胃。氨水刺激后人工数小鼠咳嗽次数,肺功能仪测定气道反应性,免疫组化检测小鼠肺中瞬时感受器电位香草酸受体1(transient receptor potential vanilloid 1,TRPV1)表达位置和半定量,蛋白质印迹法(Western Blot,WB)方法检测肺组织中辣椒素受体TRPV1蛋白表达,实时定量PCR(real-time PCR)方法检测肺组织中TRPV1、P物质受体神经肽受体1(NKl)的mRNA、神经生长因子(NGF)/神经生长因子受体络氨酸激酶(trKa)的mRNA表达,Elisa方法检测肺组织中P物质(Sbstance P,SP)表达含量。结果:LPS组小鼠咳嗽次数及气道反应性明显高于空白组小鼠,提示LPS模型小鼠造模成功,并且祛风宣肺方能明显降低模型小鼠咳嗽次数、气道反应性和小鼠肺部炎症,相关数据具有统计学意义;祛风宣肺汤可以显著的减少LPS升高的TRPV1的表达和神经源性炎症,包括上游调控轴NGF/trKa的表达。结论:结合目前对于感染后气道高反应性的认识,考虑祛风宣肺汤可能是通过减少NGF/trKa来降低TRPV1的表达和神经源性炎症,并以此来降低气道高反应性。     

基于PGE2/PKC/TRPV1信号通路研究热敏灸对膝骨性关节炎兔镇痛效应机制

目的 观察热敏灸对膝骨性关节炎(KOA)兔血清PGE2、背根神经节PKC、穴区皮肤TRPV1的影响,探讨其治疗KOA的作用机制。方法 36只雄性普通级新西兰兔随机分为空白组(6只)、假手术组(6只)、造模组(24只)。采用木瓜蛋白酶溶液注射膝关节腔法造模15d,假手术组关节腔内注射等量的0.9%NaCl溶液。造模成功后,造模组随机分成模型组(6只),艾灸组(18只),艾灸组艾灸“犊鼻”穴,每日1次,每次40 min,共7 d,根据兔艾灸过程中温度变化分为热敏灸组(10只)和非热敏灸组(7只),空白组、假手术组、模型组不予干预措施。干预结束后,肉眼、光镜下观察膝关节滑膜形态学变化;ELISA法检测血清PGE2表达;Real-time PCR法检测各组兔背根神经节PKC mRNA、穴区皮肤TRPV1 mRNA的含量。结果 (1)干预后模型组兔膝关节腔内有大量积液,滑膜增生肥厚,伴有血管增生及大量炎症细胞成团聚集;热敏灸及非热敏灸组关节腔内积液减少,滑膜异常增生改善。(2)与空白组比较,模型组血清PGE2含量明显上升(P<0.01);与模型组比较,热敏灸组、非热敏灸组血清PGE2含量下...     

蒙药槟榔十三味丸（高尤-13）止痛作用网络药理学机制研究

目的：应用网络药理学、体外实验技术,预测以及验证蒙药槟榔十三味丸的止痛作用机制。方法：TCMSP数据库及文献挖掘获取槟榔十三味丸的化学成分,SwissTargetPrediction及Uniprot数据库预测成分相关靶点信息,检索OMIM等疾病靶点数据库,收集疼痛、炎症疼痛、抑郁疼痛及神经疼痛的靶点,映射至槟榔十三味丸活性成分靶点基因,构建“活性成分-靶点”网络,STRING数据库获取蛋白相互作用关系网络信息,DAVID数据库进行GO生物过程富集分析和KEGG信号通路富集分析。HEK293细胞转染TRPV1、TRPA1质粒,制备hTRPV1/HEK293细胞和hTRPA1/HEK293细胞模型,采用全细胞膜片钳技术检测槟榔十三味丸水提取物干预转染细胞后对细胞跨膜电流的影响。结果：从槟榔十三味丸的13味药材中共得86个化学成分,筛选出805个复方治疗疼痛靶点、732个治疗炎症疼痛靶点、713个治疗抑郁疼痛靶点及793个治疗神经疼痛靶点,与热敏通道（TRPA1、TRPV1及TRPV2等）相关化合物21个,共涉及135条信号通路。体外实验结果表明,槟榔十三味丸水提取物能够激活TRPA1/HE...     

耳穴贴压疗法对初产妇潜伏期宫缩痛影响及对TRPV1和TRPA1调控的研究

目的探究耳穴贴压疗法对初产妇潜伏期宫缩痛的影响及对血清瞬时感受器电位香草酸受体1(TRPV1)和瞬时受体定位电子通道1(TRPA1)水平的调控作用。方法将住院分娩的初产妇200例随机分为观察组和对照组,对照组给予产科常规处理,观察组在其基础上实施耳穴贴压干预治疗;观察比较2组宫缩痛NRS评分、产程及干预前后血清TRPV1和TRPA1水平。结果观察组干预后10 min、20 min、40 min、60 min的NRS评分均明显低于对照组(P均0.05),最痛点NRS评分和累计重度疼痛时间、第一产程时间均明显低于或短于对照组(P均0.05);观察组干预治疗后的血清TRPV1及TRPA1水平均明显低于对照组(P均0.05)。结论耳穴贴压疗法能有效缓解初产妇潜伏期宫缩痛,缩短第一产程时间,可能与调控TRPV1及TRPA1水平有关。     

羌活胜湿汤单煎与合煎抗炎、镇痛作用比较研究

对比研究羌活胜湿汤单煎与合煎在相同剂量对抗炎、镇痛的作用,结果表明此方在蛋清性足肿胀实验中合煎高剂量比单煎高剂量效果占优,在其余指标上,合煎、单煎数值虽上下浮动,但无统计学意义     

配伍禁忌半夏、贝母对乌头汤抗氧化活性的影响

目的:考察乌头汤中加入半夏、贝母对抗氧化活性的影响,从抗氧化活性角度验证乌头反半夏与贝母的科学性.方法:分别以FRAP法测定总抗氧化活性,对DPPH·的清除能力测定清除自由基的活性.对比乌头汤中加入生半夏、川贝母与乌头汤的抗氧化活性,同时考察单煎制川乌、制川乌分别与反药及其他组方药配伍的抗氧化活性.结果:乌头汤与生半夏、川贝母配伍均会对抗氧化活性有一定的抑制作用,其中与川贝母的配伍降低作用最为明显.结论:乌头汤与生半夏,川贝母配伍会降低其抗氧化活性.     

芫花对热敏通道瞬时感受器电位香草素受体1的影响

目的:通过电生理全细胞膜片钳技术和动物行为学实验观察芫花对热敏通道瞬时变体电位香草素受体1(TRPV1)的影响,并探讨其机制。方法:以电生理全细胞膜片钳技术检测不同浓度中药芫花的75%乙醇提取物对瞬染人源TRPV1的HEK293细胞(h TRPV1/HEK293细胞)诱导产生的跨膜电流,运用TRPV1特异性拮抗剂辣椒平,观察其是否可以抑制中药芫花诱导产生的跨膜电流;行为学检测使用雄性C57BL/6小鼠30只,将其分为空白组6只,芫花高剂量组6只,芫花中剂量组6只和芫花低剂量组6只,布洛芬组6只。芫花治疗组以低、中、高(0. 195,0. 39,0. 78 g·kg~(-1)·d~(-1)) 3个剂量进行灌胃,1 h后,观察在(0±2)℃冷板和(55±1)℃热板中小鼠冷痛、热痛行为潜伏期的变化。结果:全细胞膜片钳实验显示在h TRPV1/HEK293细胞上芫花75%乙醇提取物可以激活TRPV1通道产生明显的跨膜电流,该跨膜电流与TRPV1激动剂辣椒素诱发的电流在电流密度和电流-电压关系各方面均类似;量效实验显示,与细胞外液对比,10 g·L~(-1)芫花醇提物能够激活h TRPV1/HEK293细胞诱导其产生明显的跨膜电流(P 0. 01)。10 g·L~(-1)芫花醇提物产生的跨膜电流 3 g·L~(-1)(P 0. 01)。TRPV1特异性拮抗剂辣椒平可以完全抑制10 g·L~(-1)芫花醇提物诱导产生的跨膜电流;小鼠冷热板实验中,芫花延长小鼠的冷痛和热痛行为潜伏期,与剂量呈现一定的量效关系。冷板实验中,与空白组小鼠比较,芫花中剂量组小鼠冷痛行为潜伏期延长(P 0. 01),与空白组比较,芫花高剂量组冷痛时间也显著延长(P 0. 01),布洛芬组小鼠冷痛行为潜伏期较空白组延长(P 0. 01)。在热板实验中,与空白组比较,芫花高剂量组热痛行为潜伏期显著延长(P 0. 01),布洛芬组的热痛行为潜伏期明显延长(P 0. 05)。结论:芫花的75%乙醇提物中含有TRPV1的激动剂,芫花所具备的温性、止痛和抗炎功效可能是热敏通道TRPV1活化后产生的系列效应。     

芍药甘草汤及其组成的镇痛泻下作用

结果表明：白芍是君药，甘草是臣药和佐药；白芍与甘草的剂量配比以２∶１为最佳；生甘草与白芍配伍会使白芍的镇痛作用消失；芍药甘草汤的镇痛部位在外周；芍药甘草汤有泻下作用。     

四磨汤对慢性应激小鼠多巴胺受体D1,D2的影响

目的:研究四磨汤对慢性应激小鼠多巴胺受体1,2(DR1,DR2)的影响,明确四磨汤治疗功能性胃肠病(FGIDs)的作用机制。方法:动物随机分组,采用饥饱失常、明暗颠倒以及束缚夹尾等多种方法造模,分别给予蒸馏水、多潘立酮、四磨汤(7.56 mL.kg-1)治疗,免疫组织化学法观察小鼠脑内和肠道组织DR1,DR2的表达。结果:模型组小鼠脑内和十二指肠组织中DR1,DR2的表达增加,与正常组比较有统计学差异(P<0.05);四磨汤组DR1,DR2的表达下降,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:四磨汤调节多巴胺受体D1,D2的表达,可能是其治疗功能性胃肠病的作用机制之一。     

补中益气汤加味对慢性非细菌性前列腺炎大鼠炎症因子的影响

目的：研究TNF-α、IL-6、IL-8、NO、iNOS在慢性非细菌性前列腺炎的表达,并观察补中益气汤加味积雪草对慢性非细菌性前列腺炎的作用,并初步探讨其作用机理。方法：将40只大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、消炎痛组、补中益气汤组（BZYQT）、补中益气汤加积雪草组（BZYQTJ）,每组8只,采用免疫组化法检测TNF-α、IL-6、IL-8,免疫组化法检测前列腺组织中iNOS的表达。结果：补中益气汤加积雪草组模型大鼠TNF-a、IL-6、IL-8的含量显著下降（P〈0.05,P〈0.01）,前列腺组织中NO的含量显著下降（P〈0.01）,前列腺组织iNOS平均光密度值显著减小（P〈0.05）。结论：TNF-α、IL-6、IL-8、NO、iNOS可能参与了慢性非细菌性前列腺炎发病过程,补中益气汤加积雪草可能是临床治疗慢性非细菌性前列腺炎的一种新的选择。     

乌头注射液对小鼠的镇痛作用及其药效动力学研究

 目的 观察乌头注射液镇痛作用的强弱及其药效动力学过程,求出相应的药效动力学参数,为合理用药作参考。方法 用热板法测定小鼠疼痛反应的潜伏期为痛阈指标,以吗啡为阳性对照药,进行药物镇痛作用的研究,以一次给药后药效强度变化的经时过程进行房室模型拟合和药效动力学参数计算。结果 显示乌头注射液具有显著的镇痛作用,其2 mg·kg^-1 ip作用强度与吗啡10 mg·kg^-1 ip相当。药效消除基本呈一级动力学过程并基本符合血管外给药的一房室开放模型,其吸收相速率常数K为0.02654 min^-1,药效倍增期为26.12 min,其消除相速率常数K为0.007968 min^-1,药效半衰期t_1/2E为87 min,其药效达峰时间为80.16 min,峰强度为149.24 ΔE%(58.27 s)。药效持续时间约为6～7 h。结论 乌头注射液具有肯定的镇痛作用,其药效强度较高,维持时间较长。其药效动力学参数,可为临床用药作参考。     

红蛇定痛液抗炎作用研究

目的：研究红蛇定痛液的抗炎作用,为临床应用提供佐证。方法：用二甲苯致鼠耳肿胀法及角叉菜胶致大鼠足肿胀法观察药物作用。结果：红蛇定痛液对鼠耳肿胀及大鼠足肿胀均有明显的抑制作用。结论：红蛇定痛液有较好的抗炎作用。     

电针对佐剂性关节炎大鼠脾细胞IL-1和IL-2活性的影响

近年来 ,随着神经内分泌免疫调节及分子生物学领域研究的深入 ,许多学者发现免疫细胞产生的细胞因子白细胞介素 1 ( IL- 1 )和白细胞介素 2 ( IL- 2 )参与内源性阿片肽的调制过程 ,其是否参与电针 ( EA)的镇痛过程 ,还很少见报道。为了进一步探讨 EA的镇痛机制 ,本研究试图以佐剂性关节炎 ( AA)大鼠为炎症痛模型 ,以痛阈、脾细胞中细胞因子 IL - 1和 IL- 2的活性为检测指标 ,观察细胞因子 IL- 1和 IL- 2在 EA对炎症痛镇痛中的作用。材料与方法1 .动物分组及处理选用健康 SD成年大鼠 32只 ,体重 ( 2 0 0± 2 0 ) g,雌雄各半 ,由四川…