HPLC比较研究不同产地与不同生长年限穿龙薯蓣中薯蓣皂苷元含量

 目的 研究穿龙薯蓣中薯蓣皂苷元含量与产地及生长年限的关系,为制定穿龙薯蓣的质量标准提供参考数据。方法 利用ALLTECH高效液相色谱仪测定不同产地及生长年限的穿龙薯蓣样品中薯蓣皂苷元的含量,并用SPSS16.0软件对测定结果进行统计分析。结果 薯蓣皂苷元在0.2～4.0 μg与峰面积具有良好的线性关系,回归方程为Y=1.711×10-7X+5.084×10-2,r2=0. 999 9,测定了48批穿龙薯蓣样品中薯蓣皂苷元的含量,相同生长年限不同产地样品中薯蓣皂苷元含量呈正态分布,且1年生样品中薯蓣皂苷元含量与2年及3年生相比,差异显著,而2年生与3年生样品中薯蓣皂苷元含量差异不显著。结论 穿龙薯蓣中薯蓣皂苷元含量与产地有一定相关性,且最佳生长年限为2年。     

土壤酸碱度和质地对盾叶薯蓣品质的影响

目的探讨土壤酸碱度和质地对盾叶薯蓣薯蓣皂苷元含量的影响。方法采用HPLC法对生长在不同酸碱度和质地土壤上的盾叶薯蓣薯蓣皂苷元含量进行分析。结果不同质地土壤上的盾叶薯蓣中薯蓣皂苷元含量差异不明显,但以沙壤土上的薯蓣皂苷元含量较高;生长在酸性、中性和微碱性土壤中的盾叶薯蓣薯蓣皂苷元含量较高,碱性越强,薯蓣皂苷元含量越低。结论盾叶薯蓣虽然对土壤质地的要求并不敏感,但是对土壤酸碱性的要求相当严格,因此,盾叶薯蓣引种驯化前,土壤酸碱性的检测是一个不可忽略的因素。     

盾叶薯蓣质量标准

目的: 初步制定河南产区盾叶薯蓣的质量标准。 方法: 在对盾叶薯蓣进行性状、显微及薄层鉴别的基础上,参照2010年版《中国药典》(一部)中方法测定水分、总灰分、酸不溶性灰分及醇浸出物含量,并利用高效液相色谱法测定薯蓣皂苷元与伪原薯蓣皂苷的含量。 结果: 河南产区盾叶薯蓣水分应不超过7%;总灰分不高于8%;酸不溶性灰分不得高于2%;醇溶性浸出物含量不得低于16%;盾叶薯蓣药材薯蓣皂苷元含量不得低于1%;伪原薯蓣皂苷含量不得低于0.4%。 结论: 方法简便、准确,建立和完善了盾叶薯蓣的质量标准。     

盾叶薯蓣薯蓣皂苷元积累动态研究

目的研究盾叶薯蓣薯蓣皂苷元积累动态,确定适宜的采收期。方法对不同采收期不同根茎中薯蓣皂苷元含量及含水量进行分析。结果种根在6月上旬到10月中上旬之间,薯蓣皂苷元含量呈缓慢的上升趋势,10月下旬以后就急剧下降。新生根茎在6月上旬到8月中下旬之间薯蓣皂苷元含量呈上升趋势,然后逐步下降,到10月下旬同样明显下降;生长期内种根与新生根茎含水量变化趋势不同,而且薯蓣皂苷元含量与含水量无相关关系。结论考虑到产量和薯蓣皂苷元含量两方面因素,10月中下旬采收盾叶薯蓣较为适宜。     

盾叶薯蓣药材质量标准研究

目的:建立盾叶薯蓣药材的质量标准,为该药材及其制剂的质量控制提供有效方法。方法:采用显微和薄层色谱法鉴别,并对10批药材的水分、浸出物进行检查,采用HPLC对药材中薯蓣皂苷元含量进行了测定。结果:确定了盾叶薯蓣药材的显微特征,建立了TLC鉴别方法,拟定了其水分、浸出物限量。薯蓣皂苷元的进样量在2.36~21.24μg线性关系良好(r=0.9999),平均回收率为97.33%,RSD=1.28%(n=6)。结论:该方法操作简单、重现性好、准确可靠,可较全面地控制盾叶薯蓣药材及其制剂的质量。     

盾叶薯蓣航天诱变种子实生苗的生物学特性和有效成分测定

目的:筛选优质盾叶薯蓣种质资源,探讨卫星搭载对盾叶薯蓣变异效应.方法:利用返回式卫星搭载盾叶薯蓣种子进行空间诱变处理,对空间诱变后的2个居群盾叶薯蓣的种子活力、植株生长、染色体以及薯蓣皂苷元含量进行研究.结果:空间诱变后种子表现为萌发提前,但对种子发芽率影响不明显,出现非整倍体和染色体加倍现象,二年生根状茎鲜重和薯蓣皂苷元含量显著高于对照,但三年生根状茎增重变缓,同时薯蓣皂苷元含量均有不同程度下降.结论:卫星搭载对盾叶薯蓣的种子活力有一定的促进作用,同时改变了染色体结构,二年生根状茎鲜重和薯蓣皂苷元含量显著高于对照,提供了良好的选育材料,但三年生的根状茎鲜重增长变缓,薯蓣皂苷元有下降趋势,有待进一步研究.     

贵州栽培薯蓣中薯蓣皂苷元的含量变化

贵州引种栽培的盾叶薯蓣和黄山药中薯蓣皂苷元含量分别达到2．90％和1．86％。各物侯期薯蓣皂苷元的含量变化规律,与国内其他产地报道基本一致。     

不同光强对弱光型盾叶薯蓣中薯蓣皂苷元和生物量的影响

目的在生长光强为1.5、10、30、55、100、270μmol/(m2.s)下对弱光生态型盾叶薯蓣的薯蓣皂苷元和生物量分别进行测定,以探讨不同光强与盾叶薯蓣中薯蓣皂苷元和生物量的关系,并找出弱光生态型盾叶薯蓣的最适生长光强。方法采用TLC法和RP-HPLC法测定其根状茎中薯蓣皂苷元的量。结果不同光强对盾叶薯蓣的薯蓣皂苷元的量有显著影响。在100、55μmol/(m2.s)的光强下,根状茎中薯蓣皂苷元的量最高,分别占其干质量的0.45%和0.55%。光照强度对盾叶薯蓣的生长有显著的影响,在30、55、100μmol/(m2.s)下长势良好,其中在100μmol/(m2.s)下生长最好。光照强度影响叶片的形状,随着光照强度的增加,叶片长与宽的比率也随之增加。在270μmol/(m2.s)的强光照射下,叶片长与宽的比率最大。光照强度能显著地影响植株的总叶面积,在100μmol/(m2.s)光强下植株总的叶面积最大,总的生物量最高,根状茎的生物量与整个植株生物量的比值最大。结论弱光型盾叶薯蓣是一种薯蓣皂苷元量较高的薯蓣变种,这将为该药源植物的选择育种以及栽培提供理论指导。     

氮磷钾对盾叶薯蓣产量及薯蓣皂苷元含量的影响

目的:研究大田条件下N、P、K肥料不同配比对盾叶薯蓣根茎产量及薯蓣皂苷元含量的影响.方法:采用肥料单因素正交试验,SPSS11.5统计软件包统计分析.结果:N、P、K可不同程度提高盾叶薯蓣根茎产量及薯蓣皂苷元含量,其中N、K对产量影响达到极显著水平(P＜0.01),P肥达到显著水平(P＜0.05),N、P、K单施对含量影响未达到显著水平(P＞0.05);3种肥料配施以N肥对薯蓣皂苷元含量影响达到显著水平(P＜0.05).表明肥料对薯蓣皂苷元含量影响的顺序为N＞K＞P,对根茎产量影响的顺序为K＞N＞P,综合最优组合为N2K1P2.结论:适当配比的N、P、K肥料可以同时提高盾叶薯蓣根茎产量与薯蓣皂苷元含量.     

盾叶薯蓣转录组分析及其皂苷元生物合成关键酶基因的挖掘

目的分析比较盾叶薯蓣根茎与叶片的转录组,挖掘与盾叶薯蓣中皂苷元生物合成途径相关的关键酶基因。方法利用Illumina Hi Seq2000高通量测序技术对盾叶薯蓣根茎与叶片进行转录组测序,对测序结果进行注释分析;并结合根茎与叶片中皂苷元的含量测定结果,挖掘与盾叶薯蓣中皂苷元生物合成途径相关的关键酶基因;最后利用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)技术对部分候选基因的表达模式进行分析。结果共获得了81 660个Unigene,有64.33%在NT、NR、Swiss-Prot、KOG、GO、KEGG数据库中得到注释;根据其表达量与代谢通路分析筛选出29种共227个可能参与盾叶薯蓣中皂苷元生物合成途径的催化酶基因,部分催化酶基因的表达模式与皂苷元含量具有一定相关性;并发现5个盾叶薯蓣内生菌基因。结论研究初步获得了盾叶薯蓣中参与皂苷元生物合成的候选关键酶基因,部分候选酶基因可能参与盾叶薯蓣中皂苷类成分的后修饰过程,并发现盾叶薯蓣根茎中内生菌可能参与其皂苷元的生物合成,为进一步阐明盾叶薯蓣中皂苷元生物合成的分子机制奠定基础。     

盾叶薯蓣培养细胞的生长及薯蓣皂甙元产生的变化规律

对悬浮培养的盾叶薯蓣细胞的生长及薯蓣皂甙元产生的动态变化进行了研究，比较了不同培养基及激素浓度对愈僵组织生长及皂甙元含量的影响，为细胞连续培养及培养条件的选择提供了科学的依据。     

不同产地粉萆薢总皂苷含量测定

目的:建立粉萆薢总皂苷含量测定方法.方法:以薯蓣皂苷元为对照品,高氯酸为显色剂,测定波长408 nm,采用可见分光光度法测定了5个不同产地粉草薢药材总皂苷含量.结果:薯蓣皂苷元线性范围为1.55 ～ 12.42 mg·L-1,r=0.999 5(n=6),加样回收率为100.69％,RSD 2.75％,不同产地粉萆薢总皂苷含量分别为广西玉林2.85％,RSD 1.32％;广西南宁2.76％,RSD 1.16％;浙江临安2.54％,RSD 1.38％;湖北宜昌1.94％,RSD 1.83％;四川崇州0.84％,RSD 1.75％.结论:测定方法简便,准确,重复性好,可作为粉萆薢总皂苷的含量测定.     

盾叶薯蓣WRKY转录因子的鉴定和生物信息学分析

目的鉴定盾叶薯蓣WRKY(DzWRKY)转录因子家族基因,分析DzWRKY蛋白的序列特征,检测DzWRKY在根和叶中的表达量。方法以拟南芥WRKY基因的c DNA为查询序列,应用BLASTn进行比对,应用生物信息学方法进行全长开放阅读框(ORF)预测和蛋白序列特征分析,根据转录组数据检测DzWRKY的表达量。结果共检测到27个具有全长ORF的DzWRKY家族基因,其中6个基因编码的蛋白具有2个WRKY结构域。DzWRKY蛋白均为亲水性蛋白,亚细胞预测为核蛋白,WRKY结构域序列保守程度高。进化分析均把27个DzWRKY蛋白和19个At WRKY蛋白分为3个大类群。27个DzWRKY在叶片中的表达量均比根茎低,高表达的DzWRKY基因主要集中在第I类和第IId亚类。盾叶薯蓣WRKY与已知功能的WRKY序列相似性较低。结论首次从盾叶薯蓣中鉴定出DzWRKY基因,为进一步阐明DzWRKY在盾叶薯蓣生长发育和药效成分代谢中的作用奠定基础。     

预发酵-双相联合酸水解法萃取薯蓣皂素的初步研究简

 目的 初步建立预发酵-双相联合酸水解法从黄姜药材中萃取薯蓣皂素的工艺。方法 采用正交实验设计法, 以薯蓣皂素的得率为考察指标, 分别优化预发酵和双相联合酸水解法的最佳条件, 并与两类传统提取方法进行比较。结果 将黄姜药材粉末在500 r·min^-1搅拌下于30 ℃预发酵72 h后, 加入浓硫酸和甲醇使它们的终浓度均为10%, 再加入石油醚形成双相体系, 并于120 ℃油浴中加热回流萃取4 h, 薯蓣皂素的平均得率为4.28%;而两类传统水解方法的得率则分别为3.01%和3.28%。结论 利用预发酵-双相联合酸水解法从黄姜药材中萃取薯蓣皂素简便易行, 并且提取率明显高于其他方法。     

新老产地川芎中3种内酯成分的含量测定

目的: 建立同时测定川芎中主要内酯成分(洋川芎内酯A、阿魏酸松柏酯、藁苯内酯)的方法,比较新老产地川芎药材中3种内酯成分的含量差异。 方法: 采用单因素考察同时提取3种内酯成分的最佳条件,采用反相高效液相色谱法测定3种内酯成分含量。 结果: 新老产地川芎中3种内酯成分含量差异较大,其中差异最大为阿魏酸松柏酯,其次是洋川芎内酯A、藁苯内酯。通过聚类分析发现3种内酯成分没有地域分布规律。 结论: 所建立的方法操作简便、灵敏快速、重复性好,可用于川芎药材的质量控制;新老产地川芎的内酯含量比较为川芎的引种栽培、品质评价供依据。     

龙胆植株性状与环境因子灰色关联分析

目的 通过探讨龙胆植株性状与环境因子的灰色关联度,分析龙胆生态因子对其植株生长发育的影响,为龙胆优良种质选育、人工规范化种植和划分优质高产地等提供参考。方法 对24个产地栽培或野生龙胆植株的性状及土壤因子进行测定,用手持定时测距导航全球定位系统 （global positioning system,GPS）记录各产地相应经度、纬度和海拔并通过查询中国气象科学数据共享服务网获取气候因子。运用SPSS 25.0软件对各产地植株性状进行聚类分析和变异性分析,并用DPS 7.05统计软件对龙胆植株性状与其环境因子进行灰色关联度分析。结果 灰色关联分析表明,龙胆植株性状与其环境因子存在密切关系,对龙胆植株性状影响较大的环境因子为年平均相对湿度、平均气压、年平均降水量、土壤中锌和铜的含量、有机质含量。其中,对龙胆性状影响最大气候因子、土壤因子分别是年平均相对湿度及土壤中锌的含量。从灰色关联度值来看,龙胆的植株性状受气候因子的影响较大。结论 选择适宜气候环境,有利于促进植株的生长发育和提高龙胆药材的品质。     

苗族药红禾麻黄酮类成分与环境因子的灰色关联度分析

目的:建立苗族药红禾麻药材中黄酮类成分槲皮黄酮-3-芸香苷·芦丁含量测定方法,运用灰色关联度法分析影响红禾麻药材品质产地差异性的主要环境因子,探讨环境因子对红禾麻药材品质形成机制的影响。方法:采用HPLC法,以槲皮黄酮-3-芸香苷·芦丁为对照品,流动相乙腈-甲醇-水(15∶15∶70),检测波长360 nm,测定不同产地红禾麻药材中槲皮黄酮-3-芸香苷·芦丁的含量;采用土壤养分测定仪测定不同红禾麻产地土壤中的铵态氮、速效磷、有效钾、p H和水分;通过距产地较近的气象部门查询和以全球卫星定位系统GPS、海拔表等测定地理气候因子,运用灰色关联度法对槲皮黄酮-3-芸香苷·芦丁含量与气候及土壤因子的相关性进行分析。结果:不同产地红禾麻药材槲皮黄酮-3-芸香苷·芦丁在0.094 6~4.969 mg·g~(-1),地理气候因子对红禾麻药材中槲皮黄酮-3-芸香苷·芦丁含量的积累影响较大。结论:建立的红禾麻药材黄酮类成分含量测定方法简便快捷,准确可行,可作为红禾麻药材的质量控制方法。并且通过对红禾麻中槲皮黄酮-3-芸香苷·芦丁含量与环境因子的灰色关联度分析明确了主导环境因子,为该药材的优良种质资源筛选及GAP规范化种植提供前期研究基础,同时也为苗药红禾麻药材质量标准的提升提供了实验依据。     

新老产地川芎中酚酸类成分的含量比较及川芎等级划分内涵研究

目的:分析川芎个重与其有效成分相关性,揭示川芎等级划分的内涵;比较新老产地川芎中阿魏酸、总酚酸的含量,为川芎的质量控制提供参考.方法:采用高效液相色谱法测定新老产地川芎中阿魏酸含量;采用紫外分光光度法,以没食子酸为对照品测定新老产地川芎中总酚酸含量;采用SPSS软件分析川芎个重与其阿魏酸、总酚酸相关性.结果:新老产地川芎中阿魏酸含量为0.173 4％ ～0.312 9％,总酚酸含量为0.978 6％ ～1.472 3％,新老产地川芎的阿魏酸、总酚酸含量差异较小,川芎个重与其阿魏酸含量呈正相关关系.结论:新老产地川芎中阿魏酸、总酚酸含量没有明显差异,表明新新产地与老产地适宜川芎的栽培种植,可通过新新产地的引种栽培来缓解药材的供需矛盾;川芎药材平均个重与阿魏酸含量呈正相关关系,该结论揭示了川芎等级划分的内涵,为中药材等级划分提供了理论支撑.