修复性牙本质形成过程中一氧化氮的功能——Ⅰ:一氧化氮合成酶的表达

目的：观察大白鼠磨牙窝洞制备后,修复性牙本质形成过程中一氧化氮合酶NOS的表达。方法：大白鼠磨牙窝洞制备后制作冰冻切片,免疫组化染色观察成牙本质细胞与牙髓细胞中一氧化氮合酶的表达。结果：正常大白鼠磨牙中,内皮型一氧化氮合酶（eNOS）呈阳性反应,而诱导型一氧化氮合酶（iNOS）呈阴性反应。牙体制备后即刻,损伤的成牙本质细胞中两种一氧化氮合酶均呈弱阳性反应;制备1d后,在牙髓牙本质界中浸润的中性粒细胞中表现为诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的强阳性反应,并在制备3d后,扩展至全部牙髓细胞;同阶段,内皮型一氧化氮合酶（eNOS）在上述细胞中,均呈弱阳性反应。制备7d后,修复性牙本质深部成牙本质细胞中,诱导型一氧化氮合酶（iNOS）呈阴性反应,而内皮型一氧化氮合酶（eNOS）呈阳性反应。结论：一氧化氮参与了修复性牙本质形成过程中成牙本质细胞的分化与功能调节。     

修复性牙本质形成过程中一氧化氮的功能——I:一氧化氮合成酶的表达

目的:观察大白鼠磨牙窝洞制备后,修复性牙本质形成过程中一氧化氮合酶NOS的表达。方法:大白鼠磨牙窝洞制备后制作冰冻切片,免疫组化染色观察成牙本质细胞与牙髓细胞中一氧化氮合酶的表达。结果:正常大白鼠磨牙中,内皮型一氧化氮合酶(eNOS)呈阳性反应,而诱导型一氧化氮合酶(iNOS)呈阴性反应。牙体制备后即刻,损伤的成牙本质细胞中两种一氧化氮合酶均呈弱阳性反应;制备1d后,在牙髓牙本质界中浸润的中性粒细胞中表现为诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的强阳性反应,并在制备3d后,扩展至全部牙髓细胞;同阶段,内皮型一氧化氮合酶(eNOS)在上述细胞中,均呈弱阳性反应。制备7d后,修复性牙本质深部成牙本质细胞中,诱导型一氧化氮合酶(iN-OS)呈阴性反应,而内皮型一氧化氮合酶(eNOS)呈阳性反应。结论:一氧化氮参与了修复性牙本质形成过程中成牙本质细胞的分化与功能调节。     

修复性牙本质形成的大鼠模型

目的：建立修复性牙本质形成的动物实验模型,观察修复性牙本质形成的组织开矿学特征。方法：在Ｗｉｓｔａｒ大鼠第一磨牙近中面制备窝洞,分别观察３、１５、３０ｄ,标本切片,ＨＥ染色,显微镜下观察。结果：术后３ｄ未见修复性牙本质形成。１５ｄ后可见修复性牙本工可见骨样牙本质。窝洞下原代成牙本质细胞由新分化的成牙本质细胞样细胞取代。３０ｄ后,修复性牙本质明显增加。新分化的成牙本质细胞样细胞发生极化。结论：大鼠模     

修复性牙本质形成的机理与调控

修复性牙本质的形成是牙体组织重要的保护性防御行为,在牙体组织遭受龋损、外伤、严重磨耗等损伤时,对于保护牙髓的活性和功能具有重要意义。修复性牙本质形成的机制较为复杂,有多种细胞参与,并受各类因子调控。本文就修复性牙本质的形成机制及其促进因素作一综述。     

牙本质非胶原蛋白诱导兔修复性牙本质形成的实验研究

将牙本质非胶原蛋白充填于兔切牙人工窝洞中，２周后修复性牙本质的形成明显快于对照组，提示牙本质非胶原蛋白有促进修复性牙本质形成的作用。     

E-Cadherin在修复性牙本质形成中的免疫组化研究

目的：观察细胞粘附分子Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ在修复性牙本质表成中的免疫反应和定位。方法：在大鼠上、下颌第一磨牙近中面制备单面洞,分别观察３、１５和３０ｄ。标本行常规组织学处理。利用鼠抗Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ为免疫组化ＳＡＢＣ法,对标本进行标记,ＨＥ复染。结果：Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ在术后３ｄ成牙本质细胞梁色较弱,牙髓细胞为阳性;１５ｄ后,成牙本质细胞样细胞和牙髓细胞染色阳性;３０ｄ后,成牙本质细胞样细胞     

牙本质非胶原蛋白诱导兔修复性牙本质形成的实验研究——Ⅱ.修复牙本质形成的动物实验观察

将牙本质非胶原蛋白充填于兔切牙人工窝洞中,2周后修复性牙本质的形成明显快于对照组,提示牙本质非胶原蛋白有促进修复性牙本质形成的作用。     

Osterix在小鼠牙本质生成和修复过程中的表达

目的通过免疫组织化学方法观察小鼠牙本质生成过程中Osterix(Osx)的表达变化,探索其功能及意义。方法取小鼠不同年龄段及建立修复性牙本质模型的下颌骨,石蜡包埋切片后分别进行HE染色和免疫组织化学染色。结果在钟状期晚期,Osx在牙尖处成牙本质细胞核内表达。小鼠出生后3 d,Osx在牙冠的全部成牙本质细胞核内高表达。2周龄小鼠,冠部成牙本质细胞核内几乎不表达Osx,磨牙根部成牙本质细胞核内Osx高表达。牙尖磨损建模7 d后,Osx在成牙本质细胞核内表达升高,14 d时表达量下降。结论 Osx在促进成牙本质生成和修复过程中发挥作用。     

内毒素对大鼠牙髓组织形成修复性牙本质的影响

目的：探讨局部内毒素刺激对大鼠牙髓形成修复性牙本质的影响。方法：以内毒素注射于火鼠牙阍组织，内f蟮豢试剂盒检测血液中及逆行进入牙髓组织中的内毒素浓度，HE染色观察修复性牙本质形成情况。结果：血液中实验组勺埘照纰间内毒素的含量差别有统计学意义，P〈0．001。牙髓中实验组与阴性对照组，以及与窄白对照组问内毒素的含量麓川仃统计学意义，P〈O．001。HE染色可见注射位点附近修复性牙本质形成明显，髓腔变窄，牙本质小管排列紊乱。结论：内薄素仡一定条件下能刺激夫鼠牙髓组织，使其发生保护性反应，从而促进其矿化作用，加速修复性牙本质形成。     

Ⅰ型和Ⅲ型胶原在修复性牙本质形成中的免疫定位

目的：研究Ⅰ型和Ⅲ型胶原在修复性牙本质形成中的免疫定位和分布特征。方法：在大鼠第一磨牙制备单面洞，观察修复性牙本质形成，免疫组化ＳＡＢＣ法检测Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的免疫反应。结果：在术后３ｄ，修复性牙本质尚未形成。Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原均分布于牙髓内，前期牙本质为弱阳性，术后１５ｄ，Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原在牙髓细胞内呈阳性染色。Ⅰ型胶原在前期牙本质中呈弱阳性，术后３０ｄ，Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的旨阳性染色集中于     

Reparative Dentin Formation by Dentin Matrix Proteins and Small Extracellular Vesicles

IntroductionVital pulp therapy aims at preserving pulp vitality and regenerating dentin. Therefore, the purpose of this study was to explore the effects of a combination of treated dentin matrix (TDM) proteins and dental pulp cell (DPC)-derived small extracellular vesicles (sEVs) on pulp-dentin complex repair.MethodsWe prepared TDM by chemical demineralization and mechanical disruption of teeth to a powder preparation. The sEVs were isolated from culture supernatants of DPCs and identified by nanoparticle tracking analysis, Western blotting, and transmission electron microscopy. The effect of a combination of TDM proteins and DPC-derived sEVs on DPC proliferation, migration, and odontogenic differentiation was evaluated in vitro. A minipig model of pulp injury was used to compare the clinical outcomes and tissue responses attributed to 4 materials including TDM, sEV-TDM, sEVs, and mineral trioxide aggregate.ResultsThe sEV isolated from the cell supernatant promoted DPC proliferation and migration. The combination of TDM extracts and sEV synergistically promoted the migration of DPCs but suppressed their proliferation. Real-time polymerase chain reaction and Western blot revealed that sEV-TDM enhanced the odontoblast-related protein expressions in DPCs. In in vivo studies, TDM and sEV-TDM promoted the formation of continuous reparative dentin. Furthermore, odontoblastlike high columnar cells were observed on the pulp side of the dentin bridge.ConclusionsThe sEV-TDM complex exhibits intrinsic biological activities, which has potential applications as a bioactive pulp-capping material.     

正畸牙齿移动过程中iNOS的表达及意义

目的:观察诱导型一氧化氮合酶(induc ib le n itric oxide synthase,iNOS)在大鼠正畸牙齿移动引发牙周组织改建过程中的表达,探讨NO/iNOS在正畸牙齿移动中的作用机制。方法:56只雄性SD大鼠随机分为8组。分别在正畸加力1,3,5,7,14,21,28 d后进行免疫组化染色和图像分析。结果:正畸加力3 d后,牙周组织细胞iNOS表达增强,7 d iNOS表达达到高峰(P<0.01),以后iNOS表达下降。结论:NO/iNOS参与了正畸牙周组织改建过程。     

慢性牙周炎患者牙龈组织内诱导型一氧化氮合酶表达的研究

目的:研究牙周健康者和慢性牙周炎患者牙龈组织中诱导型一氧化氮合酶的表达强度,探讨一氧化氮在牙周病发病过程中的作用.方法:选择牙周健康组、慢性牙周炎活动期组,慢性牙周炎静止期组各20例,采取免疫组织化学的方法染色,光镜下观察牙龈组织内诱导型一氧化氮合酶的表达强度.结果:慢性牙周炎时牙龈组织中诱导型一氧化氮合酶主要在鳞状上皮和间质组织的细胞胞浆中阳性表达,正常组表达强度弱于慢性牙周炎静止期组和活动期组,慢性牙周炎静止期组表达强度弱于慢性牙周炎活动期组.结论:一氧化氮参与了慢性牙周炎的发生和发展过程,牙龈组织中诱导型一氧化氮合酶的表达强度与慢性牙周炎的炎症程度密切相关.     

兔下颌骨牵张成骨中NO及NOS的变化规律及意义

目的:检测兔下颌骨牵张成骨各期血清NO及NOS的浓度变化规律,初步探讨其在牵张成骨的作用。方法:日本大耳白兔24只,随机分为6组,每组4只,随机选取一侧下颌牙槽嵴行牵张成骨术。分别处死空白对照组、牵张后1 d、1周、2周、4周、6周各组兔子,抽取耳缘静脉血2 mL,提取血清,至于-70℃冰箱保存,统一检测牵张不同时期NO含量及NOS的活性,并对局部牵张区行X线和组织学观察。结果:X线显示牵张成骨过程局部成骨区逐渐钙化,组织学显示牵张区骨小梁逐渐成熟;除6周组,其余实验各组的NO含量及NOS活性较对照组增多(P<0.01)。结论:血清NO及NOS含量的增加,提示其在牵张成骨过程中起一定作用。     

一氧化氮合酶在兔下颌骨牵张成骨过程中的表达

目的：利用种植型牵张器增高兔下颌牙槽嵴，观察成骨过程中一氧化氮合酶（NOS）的表达。方法：日本大耳白兔20只，随机分为5组，分别为空白对照组，牵张后1d组、1周组、2周组和4周组，每组4只，随机选取一侧下颌骨行牵张成骨术。术后延迟4d开始牵张，每天牵张2次，共4d。处死各组兔子，游离下颌骨进行大体观察、X线观察、组织学观察和免疫组化观察，通过细胞图像分析仪测定阳性面积，利用SPSS13．0统计软件包分析诱导型NOS（iNOS）、内皮型NOS（eNOS）和神经型NOS（nNOS）的阳性表达。结果：X线及组织学检查显示，牵张间隙内新骨逐渐形成。免疫组化观察，正常骨组织NOS仅有少量的阳性表达；iNOS在间充质细胞、成骨细胞中有阳性染色，牵张后1d、1周、2周组的阳性面积显著高于正常组（P〈0．05）；eNOS在间充质细胞、增生血管内皮细胞中有阳性染色，牵张后1d、1周、2周组的阳性面积显著高于正常组（P〈0．05）；而nNOS在各实验组均无明显的阳性表达。结论：iNOS和eNOS在牵张成骨过程的不同时期具有不同的表达，提示可能对牵张成骨的新骨形成起一定的调节作用。     

牙周炎大鼠正畸牙齿移动中牙周组织内iNOS的表达变化

目的:研究牙周炎大鼠正畸牙齿移动中组织内诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)的表达变化。方法:48只10周龄SD大鼠随机分为牙周炎组和正常组,每组24只。近中移动上颌第一磨牙,分别于加力后1、2、3、7、14、21d,2组各处死4只动物,制作切片进行iNOS免疫组织化学染色,观察比较牙周组织中iNOS的表达变化。结果:加力2、3、7、14、21d时,实验组iNOS阳性表达显著高于对照组。结论:大鼠牙周组织炎症使牙齿移动过程中iNOS表达升高,影响牙周组织改建。     

Ezrin蛋白及诱导型一氧化氮合酶在黏液表皮样癌中的表达及意义

目的探讨Ezrin蛋白、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）在黏液表皮样癌（MEC）中的表达以及在肿瘤侵袭转移过程中的作用。方法应用免疫组化SP法检测36例高分化MEC、24例低分化MEC,以及正常唾液腺组织中Ezrin蛋白、iNOS蛋白的表达,结合临床资料进行Ezrin蛋白、iNOS蛋白表达与MEC转移的相关性分析。结果Ezrin蛋白、iNOS在正常唾液腺组织、高分化MEC及低分化MEC中的表达均依次增强,差异均有统计学意义（P〈0．05）,而Ezrin蛋白和iNOS两者之间的表达也有相关性（P〈0．01）;Ezrin蛋白与iNOS的表达分别与MEC肿瘤的转移有相关性（P〈0．05）。结论Ezrin蛋白和iNOS之间存在密切关系．均与MEC的转移高度相关。     

Expression of Neurotrophic Factors in Human Dentin and Their Regulation of Trigeminal Neurite Outgrowth

Introduction

Neurotrophic factors play a significant role in the innervation of the pulp-dentin complex during and after organogenesis. There have been numerous bioactive molecules identified in the dentin extracellular matrix; however, the expression of neurotrophic factors in the dentin matrix and their biological activity are largely unknown. The purpose of this study was to characterize the relative expression of neurotrophic factors in human dentin matrix proteins (DMPs) and their effect on neurite outgrowth of trigeminal (TG) neurons.

Phenotype and behaviour of dental pulp cells during expansion culture

Objective

Primary pulp cell cultures are frequently used to study cellular responses, odontogenic potential and stem cell responses. Their isolation and expansion via a range of technical approaches are widely reported. The purpose of this study was to investigate the influence of isolation approach and extended expansion on cell phenotype and behaviour.

Design

To determine viable cell isolation, enzymatic dissociation was performed on rodent incisor pulps using collagenase, trypsin, hyaluronidase and ficin. Extended expansion culture of released cells was performed in DMEM and α-MEM media. Cultures were subsequently analysed for gene expression, cell proliferation, cell morphology and differentiation capacity up to passage 20.

Results

Data indicated that incubation of extirpated and mechanically minced rodent pulpal tissue with 0.25% Trypsin:EDTA and subsequent culture in α-MEM medium provided optimal conditions for maximal cell growth and expansion. Under these conditions, extended culture decreased cellular proliferative capacity up to passage 7, whilst higher passages demonstrated recovered growth rates. In general gene expression analysis of osteogenic and dentinogenic associated markers decreased with increasing passage number. Notably expression of TGFβs-1, -2 and -3 increased up to passage 10 as did the stem cell and pericyte/myofibroblast markers, CD74, Neuroserpin and α-SMA. Analysis of molecular phenotypes indicated little difference in lineage differentiation capacity between earlier and later passages.

Conclusions

The present study characterizes conditions for primary pulp cell isolation and expansion and indicates that both earlier and later passages maintain differentiation capacity. Continued passage however may result in selection for cells with a pericyte/myofibroblast phenotype.