毛囊黑素细胞酪氨酸酶及相关蛋白1和2等分化标记分子的研究

目的:研究毛囊黑素细胞生物学特性,特别是与黑素合成相关酶蛋白和黑素小体结构蛋白在毛囊中的表达及分布情况。方法:取正常人头皮,采用HMB-45和识别酪氨酸酶(TYR)、酪氨酸酶相关蛋白1(TRP1)、酪氨酸酶相关蛋白2(TRP2)等抗体免疫组化染色黑素细胞,研究毛囊中黑素细胞的分布、形态及TYR、TRP1和TRP2等黑素细胞分化标记分子的表达情况。结果:有功能的黑素细胞位于毛漏斗部基底层和生长期毛母质内接近毛乳头处,毛母质黑素细胞树突计数均值为5.1,高于表皮黑素细胞(P<0.01)。毛髓质中黑素细胞与皮质细胞比值约为1∶4.2,而在基底层基底细胞与黑素细胞之比约为1∶9.7。毛球HMB-45,TYR,TRP1和TRP2阳性,阳性颗粒仅局限于毛皮质和毛髓质内。图像分析结果表明:毛球部黑素细胞HMB-45、TYR、TRP1灰度值低于表皮黑素细胞(P<0.05)、毛球部、毛漏斗部及表皮的黑素细胞TRP2灰度比较差异无显著性(P>0.05)。结论:毛囊中有活性的黑素细胞主要位于毛球和毛漏斗部,它们均表达黑素细胞分化标记抗原gp100、TYR、TRP1和TRP2。而且毛母质黑素细胞前3种分子表达量高于表皮黑素细胞。     

白癜风复色区黑素细胞特异性抗原表达的研究

目的：研究白癜风复色区黑素细胞分布及gp100、酪氨酸酶（TYR）等抗原的表达。方法：对白癜风患者复色区皮肤活检的组织标本以免疫组化染色识别gp100、TYR、酪氨酸酶相关蛋白（TRP）-1和TRP-2,以HPIAS-1000彩色病理图文报告系统定量分析阳性表达的强弱。结果：色素脱失斑处未见活性黑素细胞,复色区黑素细胞数目与正常人皮肤比较差异无统计学意义（P〉0．05）。色素脱失斑内岛状复色区皮肤,近毛囊部位黑素细胞数目较多,远离毛囊部位数目较少;色素脱失斑边缘复色区内,黑素细胞在表皮及毛囊的基底层中分布较均匀。复色区黑素细胞树突短粗、数目变少。复色区阳性细胞gp100和TRP-2图像灰度值与正常皮肤比较差异无统计学意义（P〉0．05）,TYR低于正常皮肤（P〈0．05）,而TRP-1明显低于正常皮肤（P〈0．01）。结论：色素脱失斑处有功能黑素细胞缺失。复色区内可见黑素细胞,其结构、功能皆完整,数目与正常人无明显差别。复色区黑素细胞可能来源于毛囊组织．亦可能来源于色素脱失斑边缘正常黑素细胞。TRP-1的高表达可能导致复色区黑素细胞的形态异常。     

白癜风患者血清中抗酪氨酸酶IgG抗体及抗酪氨酸酶相关蛋白1 IgG抗体的检测

目的：探讨白癜风患者血清中抗酪氨酸酶IgG抗体（TYR IgG）和抗酪氨酸酶相关蛋白1 IgG抗体（TRP?1 IgG）与白癜风的关系。方法用酶联免疫吸附测定检测260例白癜风患者和50例健康对照血清中TYR IgG和TRP?1 IgG的含量。结果白癜风组TYR IgG和（或）TRP?1 IgG阳性率57.31%（149/260），TYR IgG阳性率37.3%（97/260），TRP?1 IgG阳性率33.5%（87/260），均明显高于对照组（χ2=25.441、21.630，P＜0.01）。TYR IgG阳性与TRP?1 IgG阳性不相关（r=-0.032，P＞0.05）。白癜风组TYR IgG阳性率男女间差异无统计学意义（P＞0.05），但TRP?1 IgG阳性率女性高于男性（χ2=5.811，P＜0.05）。白癜风TYR IgG阳性率≤20岁（35.9%）与＞20岁（38.3%）比较，差异无统计学意义（P＞0.05），而TRP?1 IgG阳性率≤20岁组明显高于＞20岁组（χ2=6.498，P＜0.05）。结论检测TYR IgG和TRP?1 IgG可为白癜风的诊断和治疗提供一定依据。     

白癜风相关的黑素细胞抗原

自身免疫在白癜风发病机理中占重要地位。患者血清中存在抗黑素细胞自身抗体 ,通过与黑素细胞抗原结合 ,引发一系列免疫反应 ,破坏黑素细胞。现已明确的白癜风相关黑素细胞抗原分为胞浆抗原和胞膜抗原两大类 ,这些抗原通过多种途径共同作用 ,介导了白癜风的免疫病理过程。     

进行期白癜风皮损周围黑素细胞的抗原递呈细胞相关表型的测定及其临床意义

目的测定进行期白癜风志愿者的白斑周围外观正常皮肤中黑素细胞的抗原递呈细胞相关表型。方法常规培养黑素细胞,采用流式细胞术测定黑素细胞CD3、CD19、CD20、及抗原递呈细胞相关表型CD1a、CD80、CD83、CD86、ICAM-1、CD40及HLA-DR的表达。结果进行期白癜风组培养黑素细胞抗原递呈细胞相关表型CD80、CD83、CD86、CD40、ICAM-1及HLA-DR表达均比正常对照组高,但CD1a与正常对照组比较差异无显著性(P>0.05)。而且随着黑素细胞培养传代次数增多,以上表型会逐渐减低。结论体外培养的进行期白癜风的黑素细胞可以表达抗原递呈细胞的表型,并可能直接递呈抗原给T细胞,参与白癜风细胞免疫损伤机制。     

白癜风皮损边缘黑素细胞线粒体超微结构的电镜观察

【摘要】 目的 探讨白癜风患者皮损边缘黑素细胞线粒体结构的变化。方法 在透射电镜下观察健康对照、进展期白癜风及稳定期白癜风患者皮损边缘黑素细胞形态,体视学方法测量线粒体体密度（Vv）、表面积密度（Sv）、数密度（Nv）等参数。结果 健康对照组黑素细胞可见大量黑素小体（28.57 ± 3.21）,以Ⅲ、Ⅳ期为主,线粒体规则分布在细胞内,结构正常、嵴密集,部分细胞胞质内可见自噬小体。进展期和稳定期白癜风黑素细胞内黑素小体数量减少,单位细胞内黑素小体数量分别为22 ± 6.16和17.43 ± 6.24,其中,Ⅲ期黑素小体显著减少,线粒体大小不一、形态多样,大部分线粒体明显肿胀,嵴模糊、排列紊乱甚至断裂,呈空泡状改变,未见线粒体自噬现象。线粒体形态结构定量研究显示,健康对照组Nv、Vv、Sv分别为（7.194 ± 1.434） μm－3、（4.8 ± 1.2）%、（2.42 ± 0.86） μm－1;进展期白癜风组Nv、Vv、Sv分别为（4.055 ± 0.906） μm－3、（7.4 ± 2.1）%、（3.58 ± 1.15） μm－1;稳定期白癜风组Nv、Vv、Sv分别为（5.311 ± 0.873） μm－3、（6.5 ± 1.4）%和（2.82 ± 0.94） μm－1,组间差异有统计学意义（P ＜ 0.05）。结论 白癜风皮损边缘黑素细胞线粒体受损,且进展期损伤程度大于稳定期。 【关键词】 白癜风; 黑素细胞; 线粒体; 显微镜检查,电子,透射     

白癜风患者血清中抗酪氨酸酶抗体及可溶性细胞间黏附分子1的检测

目的 探讨白癜风患者血清中抗酪氨酸酶IgG、IgM抗体滴度和可溶性细胞间黏附分子1(sICAM-1)水乎与疾病活动程度的关系和临床意义。方法 抗酪氨酸酶IgG、IgM抗体和sICAM-1检测采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法。结果 ①白癜风患者血清中抗酪氨酸酶IgG抗体平均滴度为0.316,显著高于正常人对照组0.082(P<0.001);白癜风患者血清中抗酪氨酸酶IgM抗体平均滴度为0.238,显著高于正常人对照组0.065(P<0.001)。②白癜风患者进展期血清抗酪氨酸酶IgG、IgM抗体滴度明显高于稳定期(P均<0.001),泛发型明显高于局限型(P均<0.001)。③抗酪氨酸酶IgG、IgM抗体滴度与抗黑素细胞IgG抗体阳性及IgM抗体阳性均呈正相关(P均<0.001)。④白癜风患者血清sICAM-1平均水平为697.40ng/mL,显著高于正常人对照组602.40ng/ml(P<0.001);进展期高于稳定期(P<0.001);泛发型高于局限型(P<0.001);稳定期和局限型白癜风患者血清中sICAM-1水平与正常人对照组差异无统计学意义(P均>0.05)。结论 白癜风患者血清中抗酪氨酸酶IgG、IgM抗体和sICAM-1与疾病活动性和严重程度相关。     

从大容量随机噬菌体抗体库筛选人源性抗酪氨酸酶相关蛋白1抗体

目的从大容量随机噬菌体抗体库中筛选人源性抗酪氨酸酶相关蛋白1(TRP1)单链抗体并进行鉴定及基因测序分析。方法以原核表达并纯化的TRP1为抗原,通过“吸附洗脱扩增”过程从大容量随机噬菌体抗体库中筛选特异性抗TRP1蛋白的单链抗体,分别通过ELISA和基因测序的方法对其抗原结合活性和序列进行分析鉴定。结果经过4轮筛选,获得18个能与TRP1蛋白结合的阳性克隆,其中3个克隆的噬菌体抗体能与TRP1特异性结合;基因测序分析表明,所获抗体分别属于不同的抗体克隆。结论利用噬菌体抗体库技术可以不经免疫过程制备出高特异性的人源性抗TRP1抗体。     

白癜风患者血清中抗酪氨酸酶抗体及可溶性细胞问黏附分子1的检测

目的探讨白癜风患者血清中抗酪氨酸酶IgG、IgM抗体滴度和可溶性细胞间黏附分子1（sICAM-1）水平与疾病活动程度的关系和临床意义。方法抗酪氨酸酶IgG、IgM抗体和sICAM-1检测采用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法。结果①白癜风患者血清中抗酪氨酸酶IgG抗体平均滴度为0．316，显著高于正常人对照组0．082（P〈0．001）；白癜风患者血清中抗酪氨酸酶IgM抗体平均滴度为0．238，显著高于正常人对照组0．065（P〈0．001），②白癜风患者进展期血清抗酪氨酸酶IgG、IgM抗体滴度明显高于稳定期（P均〈0．001），泛发型明显高于局限型（P均〈0．001）。③抗酪氨酸酶IgG、IgM抗体滴度与抗黑素细胞IgG抗体阳性及IgM抗体阳性均呈币相关（P均〈0．001）。④白癜风患者血清sICAM-1平均水平为697．40ng／mL，显著高于正常人对照组602．40ng／ml（P〈0．001）；进展期高于稳定期（P〈0．001）；泛发型高于局限型（P〈0．001）：稳定期和局限型白癜风患者血清中sICAM-1水平与正常人对照组差异无统计学意义（P均〉0．05）。结论白癜风患者血清中抗酪氨酸酶IgG、IgM抗体和sICAM-1与疾病活动性和严重程度相关。     

6味中药乙醇提取物对B16黑素瘤细胞酪氨酸酶及其相关蛋白-1、-2 mRNA表达的影响

目的 研究墨旱莲(旱莲草)等6味用于治疗白癜风中药的乙醇提取物对小鼠B16黑素瘤细胞酪氨酸酶及酪氨酸酶相关蛋白-1、-2(TRP-1、-2)mRNA表达的影响.方法 半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定酪氨酸酶及TRP-1、-2 mRNA的表达,并与阳性对照甲氧沙林(8-MOP)进行比较.结果 山慈姑(毛慈姑)、苦参、黑芝麻和墨旱莲的乙醇提取物显著上调细胞酪氨酸酶mRNA的表达(P<0.05);除苦参对TRP-2 mRNA有明显上调作用外(P<0.05),其他中药对TRP-1和TRP-2 mRNA的表达无明显作用(P>0.05).结论 山慈姑、苦参、黑芝麻和墨旱莲有上调酪氨酸酶mRNA的作用,苦参还可上调TRP-2 mRNA的表达.     

HMB-45 expression in the epidermis overlying juvenile xanthogranulomas

Aim HMB-45 staining of melanocytes has been described in vascular proliferations and surgical scars. We studied this staining on inflammatory tumours. Methods Histiocytic tumors were stained with HMB-45 monoclonal antibody. Results Only juvenile xanthogranulomas stained with HMB-45. Conclusion HMB-45 expression may be induced by cytokines synthesized by inflammatory cells.     

白癜风免疫微环境对黑素细胞CXCL10表达的影响

目的:明确白癜风免疫微环境对黑素细胞CXCL10表达的影响。方法:采用qRT-PCR检测进展期白癜风患者皮损组织中的细胞因子;采用qRT-PCR及ELISA检测白癜风免疫微环境中上调的细胞因子对黑素细胞系PIG1 CXCL10表达和分泌。结果:进展期白癜风患者皮损组织中IFN-γ、TNF-α和IL-1βmRNA表达上调;三者联合刺激显著上调PIG1细胞CXCL10 mRNA的表达以及蛋白分泌,并呈现时间依赖性。结论:白癜风局部免疫微环境促进黑素细胞表达及分泌CXCL10,可能参与白癜风发病。     

NB-UVB对白癜风患者黑素细胞生物学特性的影响

目的：明确窄谱中波紫外线(narrow-band UVB, NB-UVB)对白癜风患者的黑素细胞生物学特性的影响。方法：提取34例白癜风患者皮损处黑素细胞进行体外培养。每例样本分组后分别接受不同的照射剂量（0、20、40、60、80、100 mJ/cm2）的NB-UVB处理，照射后1 d采用免疫印迹法对黑素细胞中微管相关蛋白轻链3 II/I(LC3 II/I)、酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)、自噬信号磷酸化磷酸腺苷蛋白激酶(p-AMPK)、P26蛋白的表达情况进行测定。照射后2d、3d、4d采用MTT法对黑素细胞的增殖活性进行测定，采用NaOH染色法对黑素细胞中黑素含量进行测定。结果：随着NB-UVB照射剂量的增加,LC3 II/I和p-AMPK表达水平逐渐上调，p-mTOR和P26的表达水平逐渐下降。不同NB-UVB剂量下，黑素细胞增殖水平增加，但随剂量的增加，增殖的程度逐渐减弱。不同NB-UVB剂量黑素细胞中黑素水平升高，且呈剂量依赖式递增。结论：NB-UVB能够有效调节白癜风患者黑素细胞自噬相关蛋白表达水平，活化自噬信号通路，促进黑素细胞增殖及黑素合成能力。     

5-甲氧补骨脂素及山柰素对黑素细胞的酪氨酸酶活性和增殖的影响

目的：探讨5-甲氧补骨脂素（5-MOP）、山柰素人正常黑素细胞（UC）酪氨酸酶（TYR）活性、增殖以及对细胞形态的影响。方法：采用多巴氧化法分别检测5-MOP、山柰素对培养的人正常黑素细胞TYR活性及对黑素细胞增殖的影响。结果：5-MOP随浓度增加，对黑素细胞的增殖率及TYR激活率呈剂量-时间依赖性的上调，以72h作用最强。与空白对照相比，差异均非常显著；山柰素对TYR活性有抑制作用，呈现明显的量效和时效关系，与对照组相比，10μM、50μM及100μM的山柰素作用48、72h，对TYR的抑制作用明显加强，以72h抑制率为最大。山柰素对黑素细胞的促增殖作用在1μM作用最强，随着浓度增加及作用时间的延长，增殖率呈下降之势。发现5-MOP作用的黑素细胞组，细胞树突增多，多为3、4极以上，而山柰素组2极细胞则明显增多。结论：山柰素是一种有应用前景的TYR抑制剂。MC树突的变化可能与MC内TYR的功能及黑素合成有关，在黑素合成过程中，TYR可能发挥着更为关键的作用．而MC增殖对黑素产生只起相对辅助作用。     

Expression and modulation of apoptosis regulatory molecules in human melanocytes: significance in vitiligo

Although the aetiology of the hypopigmentary disorder vitiligo is ill understood, it is clear that pigment producing cells are absent from vitiliginous lesional skin. The present study was designed to investigate the possible role of melanocyte-expressed apoptosis regulatory molecules in melanocyte disappearance. Flow cytometric evaluation of p53, p21, Bcl-2 and Bax revealed no differences in in vitro expression levels between normal control and non-lesional melanocytes. Moreover, no in situ immunohistological differences were observed in melanocytes present in control, non-lesional and perilesional skin. However, an enhanced number of p53+ nuclei, in the absence of detectable p21 expression, was detected in involved areas. The observed p53 expression pattern did not involve melanocytes and could be the result of ultraviolet (UV) A irradiation. Further, we showed that UVB is capable of modulating melanocyte-expressed apoptosis regulatory molecules. Consequently, a lethal dose of UVB was given to two groups of cultured normal control and non-lesional melanocytes. No significant differences were found when comparing the percentages and kinetics of UVB-induced apoptosis in these groups. In conclusion, our results indicate that the relative apoptosis susceptibility of melanocytes in vitiligo is comparable with that of normal control cells. It is therefore unlikely that vitiligo is causally related to dysregulation of apoptosis regulatory molecules.