趋化因子RANTES和受体CCR5在心脏移植慢性排斥反应中的表达

目的探讨调节活化正常T细胞表达和分泌因子(RANTES)及其受体CCR5在心脏移植慢性排斥反应中的表达及意义。方法健康近交系Sprague-Dawley(SD)大鼠为受者,Wistar大鼠为供者,采用"套管连接技术"建立颈部心脏移植的实验模型。将SD大鼠随机分为3组:A组(n=12)供、受者均未采用任何治疗;B组(n=12)移植手术后使用环孢素A(CsA)10 mg.kg-1治疗受者,术后2～3个月采集移植心脏;C组(n=24)使用供者脾细胞(SPC)及环磷酰胺(CP)预处理受者,其中12只在术后15～60 d采集移植心脏(C1组),另外12只术后至少观察半年(C2组)。采用H-E染色观察移植心脏组织排斥反应病理改变程度,Van Gieson染色观察移植心脏血管病变(CAV)的血管狭窄程度,免疫组化检测RANTES和CCR5的表达水平。结果 SPC和CP预处理后,移植心脏的存活时间明显延长,RANTES和CCR5在冠状血管和心肌组织中呈低水平表达,移植心脏血管病和心肌纤维化明显减轻;而在急性排斥反应和CsA治疗的移植心脏组织中,RANTES和CCR5的表达水平明显增强,差异有统计学意义(P<0.05)。结论移植心脏组织中RANTES和CCR5的表达水平与移植排斥反应的程度密切相关。     

VCAM-1在大鼠心脏移植慢性排斥模型中的表达

目的：研究血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)在心脏移植慢性排斥反应中的表达及作用。方法：采用供体脾细胞（SPC）和环磷酰胺（CP）预处理移植受体,然后行异位心脏移植术,采用免疫组织化学法检测移植心脏中VCAM-1的表达。结果：SPC和CP预处理后,移植心脏的存活时间明显延长,VCAM-1的表达水平明显减低;而VCAM-1在急性排斥反应和环孢霉素A（CsA）治疗组中的表达均较SPC和CP预处理组明显增强（P＜0.01）。急性排斥反应与CsA治疗组比较,其差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：VCAM-1的表达水平与排斥反应的程度成正相关,测定受体VCAM-1的水平可以预测移植器官的功能状况,从而为慢性排斥反应的早期诊断和预防提供依据。     

大鼠异位移植心脏的心肌、血管病变观察与研究

目的探讨在心脏移植中心肌及血管病变的发生和发展情况,为预防和治疗移植排斥反应提供理论依据。方法采用颈部心脏移植模型,用供体脾细胞(SPC)和环磷酰胺(CP)预处理受体,H-E、Masson三色、VanGieson和免疫组化平滑肌细胞染色,对移植心脏的浸润细胞,心肌纤维化和移植心脏动脉硬化进行分析研究。结果经SPC和CP预处理后,移植心脏的存活时间明显延长,炎性细胞浸润,心肌纤维化和心脏动脉硬化明显减轻。结论①急性排斥反应时,移植心脏内大量炎性细胞浸润;②炎性细胞浸润是由心外膜心肌开始逐渐向心内膜方向发展;③SPC和CP联合预处理,可以预防和减缓移植心脏心肌纤维化和心脏动脉硬化。     

胸腺内注射异基因骨髓细胞对大鼠异位心脏移植影响的研究

本文采用同种大鼠颈部异位心脏移植模型研究受体胸腺内注射异基因骨髓细胞对移植心脏存活时间的影响及免疫学功能变化。实验分 4组。对照组 (Control组 )、环磷酰胺组 (CP组 )、单纯胸腺内注射异基因骨髓细胞组 (IT组 )、胸腺内注射异基因骨髓细胞辅以短期环磷酰胺组(IT +CP组 )。结果显示 :移植心脏存活时间最长的是IT +CP组为 68 3± 13 4d ,CP组移植心脏存活时间为 18 3± 2 4d ,两组间移植心脏存活时间差异显著 (P <0 0 1) ,而二者分别与Control组比较差异显著 (P <0 0 1,P <0 0 5) ,Control组、IT组移植心脏存活时间较短 ,分别为 8 5±1 4d、 7 8± 1 2d ,受体接受实验处理因素 1个月后免疫功能测定表明 :各组大鼠脾细胞的淋巴细胞转化试验无明显差异 (P >0 0 5)。IT +CP组大鼠脾细胞对供体脾细胞的单向混合淋巴细胞培养有明显抑制作用 (P <0 0 1) ,对供体靶细胞的细胞介导的细胞毒试验呈明显抑制作用 (P<0 0 1) ,说明受体对供体产生特异性免疫无反应性 ,即免疫耐受。     

胸腺注射供体脾细胞诱导移植心免疫耐受的实验研究

本实验采用大鼠腹部心脏移植模型，在移植前21天将供体脾细胞分别注射到受体的胸腺、脾脏、静脉、皮下，然后行异位心脏移植，术后1周每日腹腔注射环孢素A（CsA）10mg／kg。胸腺注射供体脾细胞联合应用CsA组移植心平均存活时间较其它组显著延长，受体对供体靶细胞没有出现细胞介导的细胞毒作用．结果表明：胸腺注射洪体脾细胞联合应用CsA能成功诱导免疫耐受，胸腺内特异性T细胞克隆消除可能与免疫耐受的形式有关．     

胸腺内注射异基因脾细胞诱导移植心免疫耐受的实验研究

目的通过大鼠同种异体心脏异位移植,探讨胸腺内注射异基因脾细胞对移植心的影响.方法用供体脾细胞(SC)在心脏移植前21d预处理受体鼠,术后1周每日腹腔注射环孢素A(CsA)10mg/kg.检测移植心存活时间、混合淋巴细胞反应(MLR)及细胞介导的细胞毒试验(CML).结果胸腺注射脾细胞抗原联合短期应用CsA组的移植心平均存活时间较其他组显著延长(P＜0.05),移植心耐受的受体鼠中MLR增殖活跃,产生免疫耐受的受体鼠的T细胞对供体鼠的靶细胞无明显的细胞毒作用.结论胸腺内注射供体脾细胞抗原预处理受体同时联合短期应用CsA,可诱导产生移植心脏的免疫耐受,且诱导移植耐受的抗原量以2.5×107脾细胞为好.     

细胞间黏附分子1与血管细胞黏附分子1在心脏移植慢性排斥反应中的表达及意义

目的研究细胞间黏附分子1（ICAM-1）与血管细胞黏附分子1（VCAM-1）在心脏移植慢性排斥反应中的表达及作用。方法采用供体脾细胞（SPC）和环磷酰胺（CP）预处理移植受体,然后行异位心脏移植术,免疫组织化学检测移植心脏中VCAM-1和ICAM-1的表达。结果SPC和CP预处理后,移植心脏中ICAM-1、VCAM-1的表达水平明显减低,而ICAM-1和VCAM-1在急性排斥反应和环孢素A（CsA）治疗组中的表达明显增强（均P〈0．05）。急性排斥反应与CsA治疗组比较差异无统计学意义。结论ICAM-1和VCAM-1的表达水平与心脏移植排斥反应的程度密切相关。     

IDO基因转染延长同种异基因大鼠移植心脏的存活

目的:了解逆转录基因载体介导的吲哚胺-2,3-加双氧酶(IDO)基因转染能否延长同种异基因大鼠移植心脏的存活时间及机理。方法:把同种异基因大鼠心脏移植模型(Lewis→BN)分成4组,A组为对照组,同种异基因大鼠心脏移植(Lewis→BN);B组:IDO基因转染后的供体心脏移植给受体大鼠;C组:空载体转染供体心脏,再移植给受体大鼠;D组:同种异基因大鼠心脏移植 CsA组(CsA5mg/kg/d×7天)。观察记录移植心脏的存活时间及术后6天组织病理学检查明确排斥反应的诊断和分级,RT-PCR检测术后6天移植心脏TNF-α的mRNA表达,FCM检测外周血活化的T细胞(CD3 CD25 )、有核细胞CD86 表达等方法探讨其机理。结果:A、B、C、D组移植心脏平均存活时间为7.2±0.45、13.2±2.16、7.1±0.62和15.6±3.21天,其中B、D组术后6天CD3 CD25 、有核细胞CD86 表达、供心组织急性排斥反应的强度和TNF-α的mRNA表达较A、C组显著降低(P<0.05),A、C组具有典型重度急性排斥反应特征而B、D组最轻。结论:逆转录基因载体介导的IDO基因转染能够延长移植心脏存活时间的作用,其机理包括抑制反应性T细胞、抑制有核细胞共刺激信号CD86表达、抑制心肌组织表达TNF-α等。     

单核细胞趋化蛋白-1和NF-κB通路在心脏移植排斥反应中的作用

目的 探讨单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)在心脏移植排斥反应中的表达及意义,并研究核因子-κB(NF-κB)通路在其中发挥的作用。方法 近交系SD大鼠为受体,Wistar大鼠为供体,“套管连接技术”行颈部心脏移植术。将SD大鼠随机平均分为4组,急性排斥组：受体未采用任何治疗;CsA组：移植术后环孢霉素A(CsA) 10mg/kg治疗受体,术后60～90d采集移植心脏;免疫耐受组：采用Wistar大鼠脾细胞(SPC)和环磷酰胺(CP)预处理SD大鼠,14d后行颈部心脏移植术;PDTC组：移植术后腹腔注射吡咯二硫氨基甲酸酯(PDTC)100mg/kg,1次/d,连续15d。Masson染色观察移植心脏纤维化程度,免疫组化及Western blotting检测MCP-1的表达。结果 急性排斥组、CsA组、免疫耐受组和PDTC组移植心脏存活时间分别为(6.53±2.48)d、(93.51±20.07)d、 (201.42±40.36)d和(142.37±24.64)d,PDTC组明显高于CsA组和急性排斥组(P＜0.05),且心肌纤维化程度明显减轻。各组MCP-1表达的积分光密度(IOD)值依次为(1.86±0.23)、(1.58±0.16)、(0.57±0.15)及(1.16±0.28),免疫耐受组明显低于其他３组,PDTC组显著低于急性排斥组和CsA组(P＜0.05)。结论 MCP-1的表达与排斥反应程度呈正相关,测定MCP-1的水平可预测移植心脏的功能状况;抑制NF-κB通路可减少MCP-1表达,明显减轻心脏移植排斥反应。     

CVF在大鼠移植心脏缺血再灌注损伤中的保护作用研究

目的 研究中华眼镜蛇毒因子(cobra venom factor, CVF)对同种大鼠移植心脏缺血再灌注损伤的保护作用机制.方法 近交系雄性B/N大鼠为供体,Lewis大鼠为受体,建立腹腔异位心脏移植模型.实验组术前给予CVF尾静脉注射,观察移植心的存活时间,并设B/N大鼠同系对照组.免疫组化法测定各组术后第1、3、5 天移植心脏的C3沉积,并观察移植心的病理变化.结果 接受CVF 20 μg/kg,2 d 1次,尾静脉给药的大鼠,移植心存活时间明显延长,平均达(11.69±0.72)d,而对照组为(6.65±0.35)d(P＜0.01),组织内C3沉积较对照组同期明显减轻,病理损害程度减轻,优于同期对照组.结论 CVF消耗补体显著延长移植心脏存活时间,能明显减轻近交系大鼠移植心脏缺血再灌注损伤.