人胎儿肝干细胞异种移植治疗小鼠暴发性肝功能衰竭

目的：探讨人胎儿肝干细胞异种移植治疗暴发性肝功能衰竭伴严重联合免疫缺陷（SCID）小鼠的可能性与有效性。方法：改进Seglen胶原酶（Ⅳ型）原位灌注结合Percol密度梯度离心法分离纯化中期妊娠流产的男性胎儿肝干细胞。经肝脏注射移植（106细胞）治疗D-氨基半乳糖（1600mg／ks）诱发的暴发性肝功能衰竭雌性SCID小鼠（治疗组），于移植前及移植后24，48，72h及1周取血测定血氨、谷丙转氨酶（ALT）、总胆红素（TBiL），于移植后1，2，4周取受体肝脏组织，PCR方法检测性别决定因子，并与未移植肝干细胞小鼠（对照组）比较。结果：治疗组小鼠中位生存时间较对照组延长（123．4hvs70．4h）（P〈0．05）；移植后治疗组血清ALT、TBiL及血氨水平降低，各时间点均低于对照组（P〈0．05）；治疗组肝脏病理损伤逐渐减轻，存活2周小鼠肝脏组织中性别决定因子呈阳性表达，随时间延长表达增强。结论：人胎儿肝于细胞移植能延长暴发性肝功能衰竭SCID小鼠的存活时间，改善其肝功能及肝脏病理指标。     

新生大鼠海马神经干细胞的分离培养及鉴定

目的：从新生大鼠海马分离培养并鉴定神经干细胞。方法：应用含有碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)和表皮生长因子（EGF）的无血清条件培养基，采用无底物的悬浮培养法培养神经干细胞，并用免疫细胞化学技术鉴定传代后形成的细胞团。结果：EGF bFGF可能明显地促进神经干细胞分裂增殖，免疫细胞化学检测发现传代后形成的细胞团中的细胞均表达神经上皮干细胞蛋白（Nestin)。结论：我们成功地建立了新生大鼠海马神经干细胞培养模型。     

丹参注射液对小鼠心肌干细胞的影响

目的：探讨丹参注射液对小鼠原位心脏成体干细胞数量和旁分泌功能的影响。方法：以不同剂量丹参注射液对小鼠进行灌胃给药,分为高剂量丹参注射液组（5g·kg-1·d-1）和低剂量丹参注射液组（0．5g·kg-1·d-1）,对照组采用相同体积生理盐水,每天1次连续1周。1周后经小鼠眼眶取血,检测血常规及肝肾功能;以小鼠新鲜心脏组织冰冻切片行免疫荧光染色,检测Sca—1＋成体干细胞数量;以Real—TimePCR检测心脏血管内皮生长因子（VEGF）、IL-6、BAD基因表达情况。结果：灌胃1周后,三组间血常规、肝肾功能差异无统计学意义（P〉0．05）;与高剂量丹参注射液组比较,低剂量丹参注射液及对照组中Sca-1＋成体千细胞数量及VEGF和IL-6基因表达显著减少,差异具有统计学意义（P〈0．05）。同时,丹参注射液高剂量组BAD基因表达较丹参注射液低剂量组和对照组显著降低,差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论：丹参注射液能增多小鼠心脏中成体心脏干细胞数量,改善旁分泌功能。     

脐带间充质干细胞对脐血单个核细胞增殖和凋亡的影响

目的：观察在低浓度血清培养下脐带间充质干细胞（UC—MSCs）对脐血单个核细胞（MNC）的增殖和凋亡的影响。方法：利用密度梯度法分离脐血单个核细胞，接种于脐带MSC建立的饲养层培养，通过计数细胞、半固体培养和流式细胞仪分别检测细胞的增殖和凋亡，以评价脐带MSC的支持造血功能和抗凋亡作用。结果：脐带间充质干细胞组单个核细胞总数及集落形成细胞（CFC）显著高于单培养组（P〈0．01），且单个核细胞凋亡率低于单培养组（P〈0．01）。结论：体外证实脐带MSC具有促进造血和抗凋亡作用。     

人肌源性干细胞的培养与鉴定

目的探讨人肌源性十细胞的分离、培养、鉴定的方法，为临床应用提供实验依据。方法采用消化法分离肌源性十细胞，应用差速贴壁法纯化干细胞；采用结蛋白（desmin）、Sca-1免疫细胞化学染色对细胞进行鉴定。结果成功获得高纯度的肌源性干细胞，免疫组织化学方法能够有效鉴定肌源性干细胞。结论可通过体外原代培养扶得高纯度肌源性干细胞，具有干细胞特征，为组织工程的临床应用提供种子细胞。     

5-氮胞苷诱导心肌组织中c-kit~+干细胞分化的实验研究

目的:创建小鼠心肌干细胞(cardiac stem cells,CSC)分离、培养的方法,借助干细胞表面标记c-kit纯化CSC,并用5-氮胞苷诱导CSC分化为心肌细胞。方法:用酶定时消化方法分离提取小鼠心脏组织中的细胞,进行体外培养;免疫磁珠法纯化c-kit阳性细胞,并用流式细胞仪检测纯化后细胞表面标记c-kit、lin和CD34的表达;以免疫细胞化学染色法检测诱导后心肌特异性蛋白T、连接蛋白-43、心肌细胞特异性结蛋白;结合形态学变化,分析不同诱导条件作用结果之间的差异。结果:从C57BL小鼠心肌组织中分离消化所得的细胞中,含有一种小而圆形、折光性强的细胞,经传代培养的细胞增殖速度比原代细胞明显为快,存在较多的类似于干细胞增殖和形态学特点的细胞。用免疫磁珠法可以分选出高纯度的c-kit+CSC,这种CSC基本不表达CD34和lin。在不同诱导条件下,此种CSC可以分化为搏动的细胞,并能表达心肌特异性蛋白。结论:从C57BL小鼠心肌组织中可以获得CSC,用免疫磁珠法可以分选出表型为c-kit+-CD34--lin-高纯度的CSC,经5-氮胞苷诱导或改变CSC生长的微环境后,此种细胞可以分化成心肌细胞,且能形...     

负载干细胞抗原的DC联合CIK细胞对乳腺癌荷瘤鼠肿瘤杀伤研究

目的：研究不同乳腺癌细胞抗原负载的DC-CIK细胞对于乳腺癌荷瘤鼠体内肿瘤的杀伤效果及其与Wnt通路的关系。方法：分离乳腺癌细胞系MCF-7/ADR中的干细胞并制备冻融抗原,以此冲击由正常人外周血提取的单个核细胞诱导培养的DC-CIK细胞,注入已建立的MCF-7/ADR乳腺癌荷瘤鼠模型中,并且与普通抗原冲击的DC-CIK细胞,未经抗原冲击DC-CIK细胞,单纯CIK细胞,及生理盐水组建立实验组及对照组,观察此5组中小鼠肿瘤细胞生长情况,通过原位末端标记法（TUNEL）检测各组肿瘤组织凋亡情况,免疫组化法检测bcl-2,Bax及β-catenin表达情况。结果：实验组和对照组小鼠肿瘤体积在治疗后存在差异,同组小鼠肿瘤体积体积在治疗前后也存在差异,对照组小鼠肿瘤体积最大（3.6245±0.09264）cm3,经干细胞抗原冲击的DC-CIK治疗组肿瘤体积最小（1.2342±0.13116） cm3,其tunel染色阳性率最高,bax表达阳性最强,bcl-2,β-catenin表达较其他组最弱。结论：经乳腺癌干细胞抗原冲击的DC-CIK细胞对乳腺癌荷瘤鼠的肿瘤组织较强的杀伤效果,其机制可能是Wnt/β-catenin信号通路中的β-catenin表达降低,并引起bax表达增高,bcl-2表达降低,从而引起肿瘤细胞凋亡。     

右旋丙亚胺(ICRF-187)预防蒽环类所致心脏毒性的基础研究

目的：探讨右旋亚丙胺（ＩＣＲＦ－１８７）预防蒽环类所致心脏的药理机制。方法：电子顺磁共振法（ＥＰＲ）、核磁共振法（ＮＭＲ）、质子相关分光术、光镜、电镜、免疫组织化学、生化反应、细胞培养及自发性高血压＊ＳＨＲ）小鼠模型。结果：①ＩＣＲＦ－１８７转换铁－蒽环类复合物中的铁，并与铁络合以抑制自由基的产生；②ＩＣＲＦ－１８７减弱心脏毒性免疫效应细胞（树突状细胞，ＴＨ，ＴＣ淋巴细胞及巨噬细胞）的作用；③ＩＣ     

落新妇苷对心脏移植排斥反应中活化T细胞p38丝裂原激活蛋白激酶信号传导通路的影响

目的：用小鼠心脏移植急性排斥反应体外模型，探讨落新妇苷对心脏移植排斥反应中活化T细胞p3S丝裂原激活蛋白激酶（p38MAPK）信号传导通路的影响。方法：分离BALB／C小鼠心肌细胞（2×10^5个·mL^-1）和C57BL／6小鼠的睥细胞（1×10“个·mL^-1），前者做刺激细胞，后者做反应细胞，进行混合细胞培养，建立小鼠心脏移植急性排斥反应体外模型。实验分3组：对照组，心肌细胞与脾细胞混合培养；落新妇苷组，在对照组基础上加入落新妇苷（15mg·L^-1）；落新妇苷加p38MAPK抑制剂组，在对照组基础上加入落新妇苷（15mg·L^-1）和p38MAPK抑制剂SB203580（5μmol·L^-1）。TUNEL法检测T淋巴细胞凋亡情况。RT-PCR和Western blot法检测T细胞p38MAPK表达情况。结果：落新妇苷组T细胞凋亡指数和p38MAPK表达均明显高于对照组（P＜0．01）。落新妇苷加p38MAPK抑制剂组T细胞凋亡指数和p38MAPK表达均明显低于落新妇苷组（P＜0．01），而与对照组相比差异无显著性（P＞0．05）。结论：落新妇苷诱导心脏移植排斥反应中活化T细胞凋亡与其激活p38MAPK信号传导通路有关。     

小鼠诱导多能干细胞向雄性生殖细胞样细胞诱导分化的研究

目的：对小鼠诱导多能干细胞向原始生殖细胞样细胞进行诱导培养,并对获得的原始生殖细胞样细胞进行鉴定。方法：在诱导干细胞培养基中对小鼠诱导多能干细胞进行培养,用蛋白质印迹法(Western blot)对Oct-4及C-kit蛋白表达水平进行鉴定,用定时定量PCR对Mvh, Fragilis, Stella的mRNA水平进行鉴定。结果：由小鼠诱导多能干细胞体外诱导分化获得的原始生殖细胞样细胞特异性表达Oct-4蛋白、C-kit蛋白以及Mv hmRNA,Fragilis RNA,Stella RNA。结论：由小鼠诱导多能干细胞成功诱导培养出原始生殖细胞样细胞,为进一步研究其向精子细胞的转化奠定了较好的基础。     

中国科学家首次用iPS细胞克隆出活体实验鼠

最近一只名为“小小”的黑色小鼠吸引了全世界的目光，这只由我国科学家首次用iPS细胞（诱导性多功能干细胞）克隆出的活体实验鼠，用自己独特的出生方法证实了iPs细胞具有与胚胎干细胞一样的全能性，该研究成果由国际权威科学杂志《自然》在线刊发，引发科学界轰动。     

五甲基槲皮素抑制醛固酮对乳鼠心脏成纤维细胞的作用

目的。醛固酮是引起心脏纤维化的重要因素，本实验旨在观察五甲基槲皮素（PMQ）是否影响醛固酮对乳鼠心脏成纤维细胞的的作用。方法和结果：（1）用MTT法检测心脏成纤维细胞活力。醛固酮明显升高细胞活力（P〈0.01）；低浓度PMQ（0.31μM-3μM）对细胞活力无明显影响，但降低（0.3μM）或完全取消（1μM-3μM）醛固酮的作用。     

大鼠骨髓基质干细胞体外分离、纯化、培养的实验研究

目的：探讨Wistar大鼠骨髓基质干细胞（ BMSCs）体外分离、纯化、培养的方法。方法对5周龄Wistar大鼠予1%戊巴比妥钠（0.006 ml/g）行腹腔麻醉,成功后于大鼠双侧后肢股骨、胫骨提取BMSCs,用贴壁培养法分离、纯化、培养BMSCs,观察细胞形态变化及绘制细胞生长曲线了解其生长、传代、扩增特性,并应用流式细胞仪检测细胞表面标志物行细胞鉴定。结果应用贴壁培养法分离、纯化、培养的大鼠BMSCs增殖迅速、生长曲线良好,经细胞表面标志物检测证实为BMSCs,且细胞具有很好的均一性（96.36%）。结论贴壁培养法能够很好地分离、纯化、培养大鼠BMSCs,并且获得的细胞具有很强的增殖能力,取第3~6代细胞用于实验研究最为合适。     

乳腺干细胞分离成功

乳腺干细胞分离成功乳腺干细胞的存在是从对人类乳腺组织的遗传分析结果以及从小鼠的乳腺能从组织碎片中再生的事实推断出的。现在，两个小组报告，他们从小鼠身上分离出了乳腺干细胞。Shackelton等人报告了一种分离方法，该方法是基于为干细胞功能引入一个标记。于是，来自分离出的这组细胞中的一个细胞便显示了其威力；     

SV40T抗原基因永生化新生大鼠前软骨干细胞株的构建

目的建立永生化大鼠前软骨干细胞（PSCs）株，为研究前软骨干细胞的分化机制及临床应用奠定基础。方法用LipofectamineTM2000介导基因转染，将含有SV40T抗原基因的真核表达载体pCMVSV40T/PUR导入经免疫磁珠分选出的原代PSCs进行稳定表达，用嘌呤霉素筛选出阳性克隆并扩大培养，观察细胞形态及生长状况，绘制细胞生长曲线，用免疫细胞化学方法和RT PCR鉴定SV40T抗原基因在转染细胞中的表达。结果分离获得转化细胞阳性克隆，用免疫组化证实FGFR 3表达阳性，提取RNA后用RT PCR法成功扩增出588 bp的片段。转染细胞经扩大培养，命名为永生化前软骨干细胞。贴壁培养的转染细胞群体倍增时间为 (22.98±2.77) h，传代、冻存和复苏对细胞形态及生长无明显影响。结论在体外培养条件下，可以从新生大鼠干骺端分离、培养出前软骨干细胞，pCMVSV40T/PUR转染能使其永生化。     

西洋参多糖组份 1(PPQ-1)对小鼠脾淋巴细胞合成细胞因子的影响

目的：筛选高效、低毒的生物应答反应调节剂。方法：采用淋巴母细胞增殖法、胸腺细胞增殖法、骨髓干细胞增殖法及微量病变抑制法，分别检测了西洋参多糖组份１（ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｆｒｏｍｐａｎａｘｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｍ，ＰＰＱ－１－①～④）体外对小鼠脾细胞合成细胞因子的影响。结果：ＰＰＱ－１－①～④虽然单独不能诱导小鼠脾细胞合成ＩＬ－２，但可协同亚适量ＣｏｎＡ（２．５ｍｇ·Ｌ－１）诱导合成ＩＬ－２，其含量为２５０～３００ｕ。另外，这四种多糖也可单独及协同亚适量ＣｏｎＡ（２．５ｍｇ·Ｌ－１）诱导合成ＩＬ－１及ＩＦＮ，ＰＰＱ－１－①～④单独还可明显诱导脾细胞合成ＩＬ－３样活性物质。结论：ＰＰＱ－１－①～④具有一定的免疫调节作用。     

鲨鱼肝活性肽S-8300抗糖尿病与细胞保护作用

目的：探讨鲨鱼肝活性肽S-8300的抗糖尿病与细胞保护作用。方法：用流式细胞仪和原位缺口末端标记（TUNEL）法分析S-8300对链佐霉素（STZ）诱导小鼠糖尿病模型胰岛细胞凋亡的影响;用MTT法检测S-8300对损伤小鼠胰岛素瘤β-cell株（NIT-1）的影响。结果：S-8300能显著降低STZ诱导的胰岛细胞凋亡,对STZ损伤的小鼠胰岛素瘤β细胞具有明显的修复和保护作用。结论：S-8300的抗STZ损伤与其对凋亡细胞的保护作用有关,可能是其降血糖作用的机制之一。     

黄芪甲苷促进脐带血干细胞向心肌细胞分化作用的研究

目的探讨黄芪甲苷对脐带血间充质干细胞向心肌细胞分化的作用。方法采用贴壁法分离人脐带血间充质干细胞,用流式细胞术对细胞表型进行鉴定。通过免疫组化方法观察黄芪甲苷对间充质干细胞向心肌细胞分化的促进作用。结果流式细胞仪检测结果表明,分离的脐带血间充质干细胞表达CD29、CD44和CD105,不表达CD34和HLA-DR。黄芪甲苷（浓度200 mg/L）作用下,间充质干细胞表达特异性心肌细胞蛋白,包括结蛋白（desmin）、α横纹肌肌动蛋白（-αsarcomeric actin）和肌钙蛋白T（C-TnT）。结论黄芪甲苷对脐带血间充质干细胞分化的促进作用,分化的心肌细胞在心肌损伤性疾病的潜在的治疗价值值得进一步研究。     

心肌球培养基血清浓度优化研究

目的 通过比较含有不同胎牛血清浓度的心肌球培养基分离培养大鼠心肌干细胞（CSCs）的效果，探讨最优的心肌干细胞血清培养浓度。方法 选取15只健康新生Wistar大鼠（出生1天龄），无菌条件下取出心脏，经胰酶和Ⅱ型胶原酶反复消化后，种植于培养瓶中，应用含20%胎牛血清的完全培养基培养组织块源性心脏祖细胞（CPCs），将所得的培养外植物源性细胞（EDCs）随机分为A、B、C 3组，各组5瓶细胞（25 mL塑料培养瓶），分别应用含10%、11%、15%不同浓度胎牛血清的心肌球生长培养基培养，培养至第三代CSCs时行细胞表面抗原C-kit染色，鉴定C-kit阳性CSCs占所获得细胞的比率，比较所得的细胞数量，生长周期和生长曲线。结果 从新生大鼠心肌组织中成功分离培养出CSCs，C-kit阳性率87%。培养后所得细胞数量以细胞倍增水平（PDL）表示，各组细胞PDL呈匀速递增，PDL水平和其递增速率（生长曲线所示）比较：B组> C组> A组。应用含11%胎牛血清的心肌球生长培养基培养EDCs获得的CSCs，与其他两组相比，具有生长周期短（P<0.05），生长数量多的特点（P<0.05）。结论 含11%胎牛血清浓度是心肌球生长培养基培养原代大鼠心肌干细胞的最优血清培养浓度。     

干细胞治疗年龄相关性心肌梗死研究进展

摘要 背景：老年人心血管疾病致死及致残率不断增加。骨髓造血干细胞和祖细胞（HSPC）移植可以治疗许多恶性和非恶性疾病。最近，在其他组织如心脏和大脑也发现了干细胞，随着干细胞生物学研究的进展，细胞治疗心肌梗死已进入早期临床试验阶段。目的：回顾临床试验证实细胞治疗心肌梗死的可行性。方法：系统回顾已发表的应用细胞治疗心肌梗死的临床试验。结果：在急性心肌梗死（AMI）经皮冠状动脉介入治疗（PCI）后应用粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员HSCP的临床试验未见临床获益。多个研究证实通过PCI治疗直接将HSCP递送至梗死相关冠状动脉可改善血流动力学结果，如左室射血分数（LVEF）。一个随机试验证明可以改善临床远期终点如死亡、再梗死和因心衰而再入院率。结论：在一些随机前瞻性试验中，细胞治疗心肌梗死可以改善血流动力学指标。