| 实时荧光定量-聚合酶链反应检测食品中金黄色葡萄球菌方法的研究 |
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| 引用本文： | 徐德顺,韩健康,吴晓芳. 实时荧光定量-聚合酶链反应检测食品中金黄色葡萄球菌方法的研究[J]. 疾病监测, 2009, 24(7): 541-544. DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2009.07.023 |
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| 作者姓名： | 徐德顺 韩健康 吴晓芳 |
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| 作者单位： | 浙江省湖州市疾病预防控制中心,浙江,湖州,313000;浙江省湖州市疾病预防控制中心,浙江,湖州,313000;浙江省湖州市疾病预防控制中心,浙江,湖州,313000 |
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| 基金项目： | 湖州市科技计划项目(No.2007YS15) |
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| 摘 要： | 目的利用实时荧光定量-聚合酶链反应（real-time PCR）技术,建立食品中金黄色葡萄球菌（金葡萄）污染的快速敏感特异的检测方法。方法以金葡菌的IFemB/I基因作为靶序列,设计一对引物和探针,以金葡菌菌株提取核酸DNA作为模板,优化引物和探针的浓度比和Mgsup2+/sup浓度,以金葡菌和10种相关细菌考核检测体系的灵敏性、稳定性和特异性。并初步应用于样品的检测。结果本研究建立的反应体系在引物和探针的浓度为0.8 mol/L、0.6 mol/L,Mgsup2+/sup浓度为3.5 mmol/L时,具有良好的特异性和敏感性。在10株相关菌株的检测中,除金葡菌出现很好的阳性外,其余菌株均为阴性。在纯菌条件下,最低检测限为44 cfu/ml。稳定性分析表明:同一样品重复检测3次IC/It值的变异系数均5％。检测样品结果显示real-time PCR方法较传统方法敏感、快捷、简便。结论该方法特异性强,稳定性高,操作简便快捷,适应食品微生物检验发展需要,具有较大的推广及应用价值。
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| 关 键 词： | 食品 金黄色葡萄球菌 TaqMan探针 荧光定量PCR |
| 收稿时间： | 2008-08-01 |
Study of TaqMan assay of real-time fluorescence quantitative PCR to detect Staphylococcus aureus in food |
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| XU De-shun , HAN Jian-kang , WU Xiao-fang. Study of TaqMan assay of real-time fluorescence quantitative PCR to detect Staphylococcus aureus in food[J]. Disease Surveillance, 2009, 24(7): 541-544. DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2009.07.023 |
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| Authors: | XU De-shun HAN Jian-kang WU Xiao-fang |
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| Affiliation: | 1.Huzhou Municipal Center for Disease Control and Prevention,Huzhou 313000, China |
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| Abstract: | Objective To establish a rapid,sensitive and specific method to detect Staphylococcus aureus in food by using real-time fluorescence quantitative PCR.Methods A pair of primers and probe were designed by taking FemB gene of Staphylococcus aureus as the target sequence.The DNA of Staphylococcus aureus strain were extracted as the template to optimize the concentration ratio of primers and probe and the concentration of Mg2+.The sensitivity,stability and specificity of the assay were tested by using Staphyloco... |
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| Keywords: | food Staphylococcus aureus TaqMan probe fluorescence quantitative PCR |
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