| 人脑组织中STUB1基因的克隆构建及表达 |
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| 作者姓名： | 赵虹 刘惠敏 徐万海 张惊宇 杨子超 赵庆杰 |
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| 作者单位： | 哈尔滨医科大学第四医院神经内科,黑龙江,哈尔滨,150001;哈尔滨医科大学第一医院神经内科,黑龙江,哈尔滨,150001;哈尔滨医科大学第四医院神经内科,黑龙江,哈尔滨,150001;哈尔滨医科大学第一医院神经内科,黑龙江,哈尔滨,150001 |
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| 摘 要： | 目的 构建人STUB1基因全长cDNA的真核表达载体DNA3.1-STUB1.观察STUB1基因在人脑胶质瘤细胞(U251细胞)中的表达.方法 RT-PCR技术扩增获得人脑组织STUB1基因全长cDNA,将扩增的产物进行TA克隆,经酶切、DNA测序鉴定正确,将STUB1基因酶切后构成pcDNA3.1-STUB1的真核表达重组质粒.用脂质体将重组质粒转染入U251胶质瘤细胞系,48h以后通过Western blotting实验观察重组质粒的表达情况.结果 RT-PCR扩增获得人脑组织中STUB1 cDNA全长912bp,构建完成真核表达重组质粒pcDNA3.1-STUB1,经DNA测序与GenBank中的人STUB1 cDNA序列一致.经neomycin(neo)筛选获得稳定表达重组质粒的单克隆细胞株后,经过Western blotting显示转染重组质粒的细胞中有高水平的STUB1基因表达.结论 成功构建了pcDNA3.1-STUB1真核表达质粒,并发现其在U251细胞中过量表达,为进一步研究STUB1基因在胶质瘤发生发展中的作用奠定了基础.
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| 关 键 词： | 脑胶质瘤 STUB1基因 基因表达 重组质粒 |
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