| 抑制凋亡相关基因PNAS-2表达后U937细胞凋亡率的改变 |
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| 引用本文： | 王海嵘,顾春红,钟璐,钟济华,韩洁英,陈芳源,欧阳仁荣. 抑制凋亡相关基因PNAS-2表达后U937细胞凋亡率的改变[J]. 诊断学理论与实践, 2007, 6(5): 422-426. DOI: 10.16150/j.1671-2870.a0931 |
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| 作者姓名： | 王海嵘 顾春红 钟璐 钟济华 韩洁英 陈芳源 欧阳仁荣 |
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| 作者单位： | 上海交通大学医学院附属仁济医院血液科上海血液学研究所,上海交通大学医学院附属仁济医院血液科上海血液学研究所,上海交通大学医学院附属仁济医院血液科上海血液学研究所,上海交通大学医学院附属仁济医院血液科上海血液学研究所,上海交通大学医学院附属仁济医院血液科上海血液学研究所,上海交通大学医学院附属仁济医院血液科上海血液学研究所,上海交通大学医学院附属仁济医院血液科上海血液学研究所 上海200001,上海200001,上海200001,上海200001,上海200001,上海200001,上海200001 |
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| 摘 要： | 目的:构建并鉴定凋亡相关基因——PNAS-2的短发夹RNA(shRNA)质粒表达载体,将其转染U937细胞,筛选后检测细胞凋亡的变化。方法:shRNA质粒载体pRNAT U6.1/NEO经限制性内切酶BamHⅠ及HindⅢ双酶切后,连接带有BamHⅠ及HindⅢ黏性末端的shRNA插入片段,转化感受态细菌,并行测序鉴定。将阳性shRNA质粒载体进行细胞转染,合并使用G418及流式细胞仪(FCM)筛选出GFP阳性细胞,应用半定量PCR鉴定shRNA封闭效果;用Annexin V-APC/7-AAD标记后,使用FCM及激光共聚焦显微镜检测细胞凋亡。结果:测序鉴定证实,PNAS-2特异的shRNA质粒表达载体构建正确;合并使用G418及FCM分选出GFP阳性细胞后,半定量PCR鉴定示shRNAⅠ、Ⅱ、Ⅲ组对PNAS-2的抑制率分别为78.1%、75.4%及51.4%。FCM显示shRNA对照组的细胞凋亡率为(3.52±1.25)%;而shRNAⅠ组为(9.23±1.88)%(P<0.01);shRNAⅡ(8.85±1.80)%(P0.05)。激光共聚焦显微镜观察显示,shRNA对照组细胞凋亡率为7.3%;shRNAⅠ组为14.7%;shRNAⅡ为13.8%;shRNAⅢ为10.3%。结论:测序结果表明,本研究成功构建了PNAS-2的shRNA质粒表达载体。半定量PCR显示shRNA抑制PNAS-2表达效果佳;抑制PNAS-2后可促使细胞凋亡,提示该基因是抗细胞凋亡基因。
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| 关 键 词： | PNAS-2 细胞凋亡 短发夹RNA |
| 文章编号： | 1671-2870（2007）05-0423-05 |
| 修稿时间： | 2007-06-08 |
Apoptosis ratio changes of U937 after inhibition of PNAS-2 by RNA interference |
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| WANG Hai-rong,GU Chun-hong,ZHONG Lu,ZHONG Ji-hua,HAN Jie-ying,CHEN Fang-yuan,OUYAN Ren-rong. Apoptosis ratio changes of U937 after inhibition of PNAS-2 by RNA interference[J]. Journal of Diagnostics Concepts & Practice, 2007, 6(5): 422-426. DOI: 10.16150/j.1671-2870.a0931 |
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| Authors: | WANG Hai-rong GU Chun-hong ZHONG Lu ZHONG Ji-hua HAN Jie-ying CHEN Fang-yuan OUYAN Ren-rong |
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| Affiliation: | Department of Hematology, Renji Hospital, Shanghai Institute of Hematology, Shanghai Jiaotong University School of Medicine, Shanghai 200001,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | PNAS-2 |
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