| P53结合位点对人 NOD8 基因的调控 |
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| 作者姓名： | 曾琪 张芸 田莉 唐清亮 胡巢凤 柏志全 |
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| 作者单位： | 暨南大学医学院病理生理学系,国家中医药管理局重点实验室,广东,广州,510632;暨南大学医学院生理学系,广东,广州,510632 |
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| 基金项目： | 广东省自然科学基金资助项目(No.06025159); 广东省教育厅自然科学基金资助项目[No.126(2005)]; 暨南大学“211工程”三期预研项目;暨南大学重点实验室基金资助项目 |
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| 摘 要： | 目的:探讨P53结合位点在NOD8基因调控中的作用。方法:利用生物信息学方法,我们发现人与黑猩猩的NOD8基因核心启动子区域相似位置含有P53结合位点;以人基因组DNA为模板,PCR扩增含有人NOD8基因序列,构建含有/缺失人P53结合位点的NOD8基因启动子驱动的、表达绿色荧光蛋白-NOD8融合蛋白的质粒pNOD8(760bp)-EGFP-NOD8和mpNOD8(750bp)-EGFP-NOD8;将构建的重组质粒经阳离子聚合物JetPeiTM介导瞬时转染HEK293细胞中,并加入不同浓度的P53抑制剂pifithrinalpha(PFT-α)处理HEK293细胞,用RT-PCR和Westrenblotting方法检测NOD8mRNA和蛋白的表达;此外,用pNOD8(760bp)-EGFP质粒转染HEK293细胞,利用染色质免疫共沉淀法(ChIP)观察P53是否与NOD8启动子结合。结果:经酶切鉴定和序列测定证实重组质粒构建成功。ChIP实验证实P53能与NOD8启动子结合。pNOD8(760bp)-EGFP-NOD8转染组中NOD8mRNA的表达显著高于pEGFP-C2转染组(P＜0.05),并且NOD8mRNA在缺失人P53结合位点的mpNOD8(750bp)-EGFP-NOD8转染组中的表达明显降低(P＜0.01);同时发现加入PFT-α的pNOD8(760bp)-EGFP-NOD8转染组NOD8mRNA的表达显著下降,并呈剂量依赖关系,其中90μmol/LPFT-α对NOD8mRNA表达的抑制作用最为显著(P＜0.01)。与mRNA检测结果一致的是pNOD8(760bp)-EGFP-NOD8转染组NOD8蛋白的表达量显著高于对照组pEGFP-C2;而mpNOD8(750bp)-EGFP-NOD8转染组NOD8蛋白的表达量明显低于pNOD8(760bp)-EGFP-NOD8转染组和加入PFT-α的pNOD8(760bp)-EGFP-NOD8转染组(P＜0.01)。结论:P53结合位点在NOD8基因调控中起着重要的作用,并且P53结合位点与NOD8基因之间可能存在正反馈调节。
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| 关 键 词： | 启动子 基因 NOD8 P53 结合位点 核苷酸结合寡聚结构域样受体 |
| 收稿时间： | 2011-11-09 |
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