| 单纯疱疹病毒Ⅱ型潜伏相关转录体真核表达载体的构建及表达 |
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| 引用本文： | 吕芳彪,杨慧兰. 单纯疱疹病毒Ⅱ型潜伏相关转录体真核表达载体的构建及表达[J]. 中国组织工程研究, 2012, 16(42): 7866-7870. DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2012.42.015 |
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| 作者姓名： | 吕芳彪 杨慧兰 |
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| 作者单位： | 1华南理工大学生物科学与工程学院,广东省广州市 5100062解放军广州军区广州总医院皮肤科,广东省广州市 510010 |
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| 摘 要： | 背景：单纯疱疹病毒Ⅱ型潜伏相关转录体开放读码框1真核表达载体的构建可以为研究单纯疱疹病毒Ⅱ型潜伏相关转录体开放读码框1在病毒潜伏复发中的功能奠定基础。目的：构建含存单纯疱疹病毒Ⅱ型潜伏相关转录体开放读码框1的真核表达载体,并通过转染非洲绿猴肾细胞(Vero),验证载体的体外表达情况。方法：根据单纯疱疹病毒Ⅱ型潜伏相关转录体开放读码框1基因序列设计一对引物,以单纯疱疹病毒Ⅱ型 333标准株基因组为模板PCR法扩增出开放读码框1基因,克隆至真核表达载体上,并进行酶切鉴定以及测序;利用X-fect转染试剂盒将重组质粒pEGFP-C2/潜伏相关转录体开放读码框1转染vero细胞,RT-PCR检测其mRNA水平的表达,并用荧光倒置显微镜观察融合蛋白的表达。结果与结论：开放读码框1基因的体外扩增目的片段为741 bp,所构建的真核表达载体pEGFP-C2/潜伏相关转录体开放读码框1经双酶切鉴定,与预期大小一致,测序结果与NCBI收录的开放读码框1基因序列一致;重组质粒pEGFP-C2/潜伏相关转录体开放读码框1转染vero细胞后,RT-PCR 验证有目的基因的转录,荧光显微镜观察到融合蛋白在转染的Vero细胞中表达。表明成功构建pEGFP-C2/潜伏相关转录体开放读码框1真核表达载体,并且实现其在非洲绿猴肾细胞(Vero)中的表达。
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| 关 键 词： | 单纯疱疹病毒Ⅱ型 潜伏相关转录体 开放读码框1 真核表达载体 转染 体外表达 |
| 收稿时间： | 2012-02-17 |
Construction and expression of a herpes simplex virus type II latency-associated transcript eukaryotic expression vector |
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| Lü Fang-biao,Yang Hui-lan. Construction and expression of a herpes simplex virus type II latency-associated transcript eukaryotic expression vector[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2012, 16(42): 7866-7870. DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2012.42.015 |
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| Authors: | Lü Fang-biao Yang Hui-lan |
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| Affiliation: | 1School of Biological Science and Engineering, South China University of Technology, Guangzhou 510006, Guangdong Province, China
2Department of Dermatology, Guangzhou General Hospital of Guangzhou Military Area Command of Chinese PLA, Guangzhou 510010, Guangdong Province, China |
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| Abstract: | |
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