| 肝片吸虫组织蛋白酶L基因的克隆、表达和免疫原性分析 |
| |
| 作者姓名： | 李晓娟 闻晓波 冉旭华 李树东 王春仁 朴范泽 |
| |
| 作者单位： | 黑龙江八一农垦大学预防兽医学省重点实验室，大庆 163319 |
| |
| 摘 要： | 目的 克隆和表达肝片吸虫组织蛋白酶 L 基因（FhCL），分析其免疫原性。 方法 根据GenBank公布的FhCL基因序列设计引物，以肝片吸虫总RNA为模板，通过RT-PCR扩增FhCL基因编码序列，PCR产物经TA克隆，通过EcoRⅠ、HindⅢ双酶切和测序鉴定获得重组质粒pMD18-T/FhCL，并将其亚克隆入原核表达载体pET30a（+），经PCR，以及BamHⅠ、HindⅢ双酶切和测序鉴定，构建原核表达质粒pET30a（+）-FhCL，转化大肠埃希菌(E. coli)BL21（DE3）pLysS，异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达并获得纯化的重组蛋白FhCL，用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）鉴定，以及蛋白质印迹（Western blotting）分析该重组蛋白对感染肝片吸虫的山羊血清及免疫的SD大鼠血清的免疫反应性。结果 PCR和BamHⅠ、HindⅢ双酶切均可见约1 000 bp的条带，测序结果显示重组质粒pET30a（+）-FhCL构建成功。SDS-PAGE结果表明，重组蛋白相对分子质量约为 Mr 42 000（含6个组氨酸标签），与目的蛋白相符，以包涵体形式表达。Western blotting分析结果显示，纯化的重组蛋白FhCL可被感染肝片吸虫的山羊血清和免疫的SD大鼠血清识别，在目的条带Mr 42 000处见单一特异性条带，而阴性对照血清则无反应带。 结论 克隆及表达了肝片吸虫组织蛋白酶 L 编码基因，重组蛋白具有良好的免疫原性。
|
| 关 键 词： | 肝片吸虫；组织蛋白酶L基因；克隆；原核表达 |
|
| 点击此处可从《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》浏览原始摘要信息 |
|
点击此处可从《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》下载免费的PDF全文 |
