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| 分化型胚胎软骨发育基因1特异性小干扰RNA表达质粒的构建和鉴定 | |
| 引用本文： | 魏 炎,郏雁飞,郑 燕,马晓丽,汪运山. 分化型胚胎软骨发育基因1特异性小干扰RNA表达质粒的构建和鉴定[J]. 中国组织工程研究, 2011, 15(24): 4489-4492. DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2011.24.029 |
| 作者姓名： | 魏 炎 郏雁飞 郑 燕 马晓丽 汪运山 |
| 作者单位： | 1山东省医学科学院基础医学研究所,山东省济南市 2500622山东大学附属济南市中心医院,山东省济南市 250013 |
| 基金项目： | 济南市科技局科技计划项目(200905045-1),国家自然科学基金(81000869)资助项目。 |
| 摘 要： | 背景：分化型胚胎软骨基因1可调控肿瘤生长、凋亡、衰老相关因子,与肿瘤的发生发展有着重要的联系。目的：构建针对人分化型胚胎软骨基因1的小干扰RNA表达载体。 方法：从NCBI中查找人分化型胚胎软骨基因1基因全长mRNA序列,利用Katahdin提供的在线小干扰 RNA模板序列设计软件,设计针对分化型胚胎软骨基因1的2条shRNA 的 DNA 模板单链,合成靶向分化型胚胎软骨基因1基因转录可形成茎环结构的寡聚核苷酸,退火后与酶切后的pGreenPuro™ shRNA Cloning and Expression Lentivector质粒连接,在JM-109菌株中扩增,并进行质粒DNA琼脂糖凝胶电泳分析、紫外分光光度计检测、菌落PCR以及测序鉴定。 结果与结论：将含有分化型胚胎软骨基因1目标序列25 bp 的双链 DNA插入片段,连接到pGreenPuro™ shRNA Cloning and Expression Lentivector质粒形成重组质粒。质粒DNA琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计分析结果确认所提质粒纯度较高,可用于后续实验。菌落PCR结果表明产物大小约为170 bp,与预期相符。测序结果表明pGreenPuro™ shRNA Cloning and Expression Lentivector质粒已经插入人分化型胚胎软骨基因1的干扰合成片段,无碱基突变。成功构建了靶向分化型胚胎软骨基因1-小干扰 RNA表达载体。 |
| 关 键 词： | 分化型胚胎软骨基因1 小干扰 RNA 构建 质粒 基因表达 |
| 收稿时间： | 2010-12-08 |
Construction and identification of small interfering RNA expression plasmid target to differentiated embryo-chondrocyte expressed gene 1 |
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| Wei Yan,Jia Yan-fei,Zheng Yan,Ma Xiao-li,Wang Yun-shan. Construction and identification of small interfering RNA expression plasmid target to differentiated embryo-chondrocyte expressed gene 1[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2011, 15(24): 4489-4492. DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2011.24.029 | |
| Authors: | Wei Yan Jia Yan-fei Zheng Yan Ma Xiao-li Wang Yun-shan |
| Affiliation: | 1Institute of Basic Medicine, Shandong Academy of Medical Sciences, Jinan 250062, Shandong Province, China 2Jinan Central Hospital, Shandong University, Jinan 250013, Shandong Province, China |
| Abstract: | |
| Keywords: | |
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