Dyskerin假尿苷合成酶1对胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响研究

目的 探讨Dyskerin假尿苷合成酶1(Dyskerin pseudouridine synthase 1,DKC1)对人脑胶质瘤U87细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其可能的作用机制。方法 采用Control siRNA、DKC1 siRNA分别转染人脑胶质瘤U87细胞; Western blot检测DKC1蛋白表达水平及AKT、p-AKT、p70S6K、p-p70S6K蛋白表达水平的影响,基质金属蛋白酶(matrix metalloprotein,MMP)-2、MMP-9的表达量。细胞计数试剂盒(CCK-8)、细胞增殖实验检测DKC1 siRNA对人脑胶质瘤U87细胞增殖的影响;细胞划痕实验及transwell迁移、侵袭实验检测细胞的迁移、侵袭能力。结果 (1)通过CCK-8实验发现下调DKC1基因后,与Ctrl siRNA组比较,在24 h、48 h、72 h、96 h时间点DKC1组胶质瘤U87细胞OD值明显降低,差异有统计学意义(P 0. 01-0. 001)。(2)划痕实验显示:下调DKC1基因后,与Ctrl siRNA组比较,在0 h、24 h、48 h时间点DKC1组胶质瘤U87细胞迁移距离小,差异有统计学意义(P 0. 01-0. 001)。(3) transwell实验显示:下调DKC1基因后,与Ctrl siRNA组比较,DKC1组胶质瘤U87细胞迁移和侵袭细胞个数均明显减少,差异有统计学意义(均P 0. 01)。(4) Western blot实验显示:与Ctrl siRNA组相比,DKC1组的基因序列的蛋白表达明显降低(P 0. 05)。下调DKC1基因后,DKC1组的AKT、p AKT蛋白表达较Ctrl siRNA组变化不明显,差异无统计学意义(均P0. 05),说明下调胶质瘤U87细胞中DKC1基因表达对于AKT、p AKT的表达无明显影响; DKC1组p70S6K、pp70S6K蛋白表达较Ctrl siRNA组明显降低,差异有统计学意义(P 0. 05-0. 01),表明在U87细胞中下调DKC1基因对p70S6K、p-p70S6K的表达水平有明显的抑制作用。DKC1组MMP2、MMP9蛋白表达较Ctrl siRNA组明显降低,差异有统计学意义(P 0. 05-0. 01),表明在U87细胞中下调DKC1基因对MMP2、MMP9的蛋白表达水平有明显的抑制作用。结论 (1) DKC1对胶质瘤生物学行为的影响,提示DKC1可能参与了胶质瘤的发生和发展;(2) DKC1 siRNA靶向干扰了DKC1的表达,同时下调DKC1后AKT、p-AKT的表达水平无明显变化,p70S6K、p-p70S6K蛋白的表达水平明显降低;(3) DKC1组胶质瘤U87细胞MMP2、MMP9的表达水平较Ctrl siRNA组明显降低;(4)下调DKC1的表达水平能够抑制人脑胶质瘤U87细胞迁移、侵袭的能力。