SH-SY5Y神经细胞中α7神经型尼古丁受体基因沉默对CaM、CaMKⅡ蛋白水平的影响 |
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引用本文: | 张淑丽,官志忠,肖雁,吴昌学,齐晓岚.SH-SY5Y神经细胞中α7神经型尼古丁受体基因沉默对CaM、CaMKⅡ蛋白水平的影响[J].中风与神经疾病杂志,2016(3):207-210. |
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作者姓名: | 张淑丽 官志忠 肖雁 吴昌学 齐晓岚 |
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作者单位: | 1. 贵州医科大学分子生物学重点实验室,贵州贵阳,550004;2. 贵州医科大学分子生物学重点实验室,贵州贵阳550004;贵州医科大学病理学教研室,贵州贵阳550004 |
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基金项目: | 国家自然科学基金资助项目(81360178),教育部“长江学者和创新团队发展计划资助”(IRT13058),贵州省科技厅重大专项(黔科合重大专项字2014 [6008]),贵州省科技厅项目(201344;黔科合SY字[2013]3020) |
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摘 要: | 目的构建稳定的α7 n AChR沉默的神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)细胞,研究α7神经型尼古丁受体(n AChR)基因沉默对钙调蛋白(Ca M)、钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca MKⅡ)水平的影响,了解α7 n AChR神经保护作用及其与阿尔茨海默病(AD)发病机制的关系。方法将α7 n AChR shRNA重组质转染到SH-SY5Y,用含嘌呤霉素的培养液筛选,挑选阳性克隆后采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹方法(Western-blot)检测细胞中α7n AChR mRNA及蛋白表达水平的变化;Western-blot方法测定Ca M、Ca MKⅡ蛋白表达水平。结果获得稳定转染α7 n AChR shRNA重组质粒的细胞克隆株,与对照组相比,α7 n AChR mRNA及蛋白表达量分别减少了95%和80%。Ca M、Ca MKⅡ蛋白表达量分别减少了48.5%和35%。结论成功构建了α7 n AChR mRNA沉默的SH-SY5Y细胞细胞株,α7 n AChR沉默降低了Ca M、Ca MKⅡ的蛋白水平,可能影响信号通路转导,这可能与阿尔茨海默病(AD)的发病有一定的关系。
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关 键 词: | RNA干扰 α7神经型尼古丁受体 CaM CaMKⅡ SH-SY5Y细胞 |
Influence of α7 neural nicotinic receptor gene silencing on the protein levels of CaM and CaMK Ⅱ in SH-SY5Y cells |
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Abstract: | |
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Keywords: | RNA interference α7 nAChR CaM CaMK Ⅱ SH-SY5Y Cell |
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