Fas基因沉默对帕金森病大鼠脑纹状体多巴胺能神经元凋亡的影响及机制研究

目的 探讨脂肪酸合成酶(Fatty acid synthase,Fas)基因沉默对帕金森病大鼠脑纹状体多巴胺能神经元凋亡的影响及机制。方法 取40只大鼠,30只大鼠脑纹状体注射4 μL 6-羟基多巴胺(6-Hydroxydopamine Hydrobromide,6-OHDA)建立帕金森病大鼠模型,剩余10只为假手术组,脑纹状体注射等量2 g/L抗坏血酸的生理盐水; 取建模成功的27只大鼠并随机分为模型组、阴性对照组和沉默组,每组各9只; 阴性对照组和沉默组分别向大鼠纹状体内注射3 μL含无义序列的短片断干扰RNA(Small interfer RNA,siRNA)和Fas siRNA,模型组和假手术组分别向大鼠纹状体内注射等量生理盐水; 干预1周后实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)和Western blot检测大鼠纹状体多巴胺能神经元Fas mRNA和蛋白相对表达水平,苏木精-伊红(hematoxylin eosin,HE)染色观察大鼠纹状体多巴胺能神经元损伤情况,原位末端标记法(TdT-mediated dUTP nick and labeling,TUNEL)染色检测大鼠纹状体多巴胺能神经元凋亡,RT-qPCR,Western blot检测纹状体多巴胺能神经元Fas配体(Fas Ligand,Fasl)、Fas相关死亡结构域蛋白(Fas-associateddeathdomain,FADD)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-8(Cysteine containing aspartate-specific proteases-8,Caspase-8)mRNA、蛋白相对表达水平。结果 与假手术组比较,模型组、阴性对照组和沉默组Fas mRNA和蛋白相对表达水平升高(P<0.05); 与模型组和阴性对照组比较,沉默组Fas mRNA和蛋白相对表达水平降低(P<0.05); HE染色显示,Fas基因沉默后神经元排列紊乱程度及胞质肿胀程度减轻,间质较为清晰,空泡皱缩坏死减少; 与假手术组比较,模型组、阴性对照组和沉默组神经元凋亡率升高(P<0.05); 与模型组和阴性对照组比较,沉默组神经元凋亡率降低(P<0.05); 与假手术组比较,模型组、阴性对照组和沉默组Fasl,FADD,Caspase-8 mRNA及蛋白相对表达水平升高(P<0.05); 与模型组比较,沉默组Fasl,FADD,Caspase-8 mRNA及蛋白相对表达水平降低(P<0.05)。结论 Fas基因沉默能抑制帕金森病大鼠脑纹状体多巴胺能神经元凋亡,且可能通过下调Fas,Fasl,FADD,Caspase-8 mRNA及蛋白表达水平来发挥调控作用。