|
|||||
|
|
| 基于GS筛选系统的动物细胞高效表达载体的构建及应用 | |
| 引用本文： | 高招刚,邵勇,高丽华,潘芸,刘羽,李伊培,胡显文,陈惠鹏.基于GS筛选系统的动物细胞高效表达载体的构建及应用[J].军事医学科学院院刊,2014(10). |
| 作者姓名： | 高招刚 邵勇 高丽华 潘芸 刘羽 李伊培 胡显文 陈惠鹏 |
| 作者单位： | 1. 安徽大学生命科学学院,合肥,230601 2. 军事医学科学院生物工程研究所,北京,100071 3. 沈阳药科大学生命科学学院,沈阳,110016 |
| 基金项目： | “重大新药创制”国家科技重大专项资助项目 |
| 摘 要： | 目的：通过插入GS筛选系统和替换启动子改造载体以获得高效表达细胞系。方法将pIRES2-EGFP多克隆位点上的BamHⅠ位点突变，构建一个新的载体pIRES2-EGFP-B，通过AseⅠ和NheⅠ双酶切其上的巨细胞病毒（CMV）启动子，加入谷氨酰胺合成酶（ GS）基因筛选标志，再通过PacⅠ和NheⅠ双酶切，插入人巨细胞病毒（hCMV）启动子，构建载体pHGS1．0。将目的基因分别插入载体pHGS1．0和pIRES2-EGFP中，通过比较重组蛋白TEM8（1-227）-VEGFR1domain2-IgG2（TV-IgG2）表达来分析新构建载体的优越性。结果成功插入GS筛选标志，并加入hCMV启动子，人免疫球蛋白定量试剂盒分析发现，重组蛋白表达量提高了5倍。结论通过GS系统筛选，得到高效表达目的蛋白载体系统，为后续的高效表达细胞系筛选奠定了基础。 |
| 关 键 词： | 谷氨酰胺合成酶 甲氨喋呤 蛋氨酸亚氨基代砜 巨细胞病毒 高效表达细胞系 重组蛋白质类 |
Animal cell screening system based on GS efficient expression vector and its application |
|
| GAO Zhao-gang,SHAO Yong,GAO Li-hua,PAN Yun,LIU Yu,LI Yi-pei,HU Xian-wen,CHEN Hui-peng.Animal cell screening system based on GS efficient expression vector and its application[J].Bulletin of the Academy of Military Medical Sciences,2014(10). | |
| Authors: | GAO Zhao-gang SHAO Yong GAO Li-hua PAN Yun LIU Yu LI Yi-pei HU Xian-wen CHEN Hui-peng |
| Abstract: | |
| Keywords: | glutamine synthetase methotrexate methionine sulphoximine cytomegalovirus efficient expressing cell lines recombinant proteins |