重组 GST-β-GT 融合蛋白的原核表达、纯化及活性鉴定

目的：构建噬菌体β‐GT蛋白的原核重组体系，诱导表达、纯化GST‐β‐GT 融合蛋白并对其进行酶活性测定。方法利用PCR技术从T4噬菌体中扩增β‐GT基因；经T‐A克隆，获得β‐GT基因片段，经酶切连接，构建原核表达载体pGEX‐6P‐1‐β‐GT ；经测序鉴定序列正确后，将所构建的载体转化进入大肠埃希菌BL21（DE3）中进行表达。利用IPTG诱导，经10％ SDS‐PAGE鉴定目的蛋白表达后，采用GST柱纯化目的蛋白；通过酶切和qPCR鉴定其活性。结果成功扩增了噬菌体β‐GT基因；重组质粒在大肠埃希菌BL21（DE3）中诱导表达出GST‐β‐GT融合蛋白；通过GST柱纯化后获得了GST‐β‐GT融合蛋白，纯度达95％；通过酶切和qPCR验证，此GST‐β‐GT融合蛋白具有T4‐β‐GT酶的活性。结论。原核表达GST‐β‐GT融合蛋白具有糖基转移酶活性。