细胞间隙连接在多发性骨髓瘤SP细胞生物学行为中的作用

目的 观察不同来源间充质干细胞(MSCs)中由连接蛋白43(Cx43)组成的细胞间隙连接(GJIC)及其介导的信号对多发性骨髓瘤(MM)侧群细胞(SP细胞)生物学行为的影响，并探讨其可能机制。方法 分离培养不同来源的间充质干细胞(MSCs)；应用流式细胞术分选MM细胞株RPMI 8266的SP细胞；采用RT-PCR技术及蛋白印迹(Western blot)法检测不同来源MSCs、RPMI 8266、SP细胞中Cx43基因及蛋白水平表达；直接共培养观察不同来源MSCs对SP细胞周期、Cx43蛋白表达、体外集落形成能力、干细胞相关基因表达、细胞因子分泌和耐药的变化以及加入连接通道抑制剂18α甘草次酸(α-GA)后的影响。结果 MM-MSCs与ND-MSCs形态及表型无明显区别，与RPMI 8266细胞均表达较高水平的Cx43；与MM-MSCs共培养可使更多SP细胞进入G0期(P＜0.001)，SP细胞的c-myc、KIF4和SOX2基因表达显著上调，而Oct-4基因表达下调，加入α-GA后，c-myc、KIF4和SOX2均有不同程度下调，但无显著性差别；使Cx43表达上调，分别为(31.00±2)%和(39.00±2)%；使体外集落形成能力上调，加入α-GA可部分抑制该作用；RPMI 8266存在少量c-myc、KIF4、SOX2和Oct-4基因表达，SP细胞亚群中该类基因明显上调，MM-MSCs分泌高水平的白介素(IL)-6，与SP细胞共培养后，其上清液中IL-6、IL-10及TGF-β表达上调(P=0.0072，P=0.037)；bFGF和IL-17则无明显变化。加入α-GA后，上清液中IL-6、IL-10和TGF-β水平降低；MM细胞对硼替佐米诱导的凋亡敏感，但SP细胞敏感性较差，与MM-MSCs共培养显著减少硼替佐米介导的细胞凋亡，加入α-GA可部分恢复MM细胞对硼替佐米的敏感性。结论 MM-MSCs与多发性骨髓瘤SP细胞上调Cx43蛋白表达，形成更多GJIC，并通过改变MSCs细胞因子分泌谱，促进SP细胞增殖和耐药，可能是最终导致MM复发的原因之一。

Role of intercellular junctions in the biological behavior of SP cells of multiple myeloma