巴戟天寡糖对成肌细胞增殖及分化的影响

目的：观察了巴戟天寡糖对成肌细胞增殖分化的作用，并初步探讨其机制。方法：采用离体纯化培养的乳鼠双侧后肢骨骼肌成肌细胞的方法，以常规细胞培养为正常对照、5-氮杂胞苷（10μmol／L）为阳性对照，以①成肌细胞形态学变化。②免疫组化法鉴定结蛋白（Desmin）。③免疫组化法测定转化生长因子β1（TGF-β1）和增殖细胞核抗原（PCNA）。④生长曲线的绘制。⑤MTT（Methyl Thiazolyl Tetrazolium）法检测巴戟天寡糖对成肌细胞增殖的影响为指标，观察巴戟天寡糖100μg／ml、300μg／ml、500μg／ml三种浓度对其增殖及分化的影响。结果：1．成肌细胞培养24h后可见大量折光率强的圆形细胞贴壁；48h后见大量梭形或纺锤形的单个核细胞出现；72h后梭形细胞的数量逐渐增加，成肌细胞细长，并相互拉网，细胞从单个核期进入合体细胞阶段；培养第5天后，在镜下可观察到分化状态较好的肌管有自发性搏动的收缩现象。2．成肌细胞desmin胞浆呈阳性反应，细胞核外周及胞浆呈棕黄色。3．巴戟天寡糖两组单核成肌细胞及多核初生肌管内胞浆中TGF-β1均呈阳性反应。结果表明在一定剂量范围内，巴戟天寡糖对成肌细胞内TGF-β1的表达有增强作用，过大剂量时反而抑制其表达。4．巴戟天寡糖各剂量组单核成肌细胞及初生肌管内细胞核的PCNA阳性反应均较对照组强，且随剂量递增而显强阳性反应。5．原代成肌细胞生长培养48h后开始增生，早期增殖较快，倍增时间为5d，6、7d进入平稳期。6．巴戟天寡糖以剂量方式促进成肌细胞增殖，且各组与对照组相比均有显著差异，在500μg／m剂量达到最大效应（P〈0．05）。结论：巴戟天寡糖具有明显促进成肌细胞增殖及分化的作用，可在一定剂量范围内增加成肌细胞的TGF-β1表达，但是剂量过高反而抑制其表达,其原因还需进一步深入探讨。PCNA可作为成肌细胞增殖的一种标志物。