门冬酰胺酶效价和纯度测定方法研究

目的:建立和优化鉴别、纯度和效价测定等质量控制方法，提高和完善大肠埃希菌(Escherichia coli)、欧文氏菌(Erwinia carotovora)来源的门冬酰胺酶的质量标准。方法:考察了Xbridge protein BEH SEC(300 mm×7.8 mm, 3.5μm, 200?)和TSK G3000swxl(300 mm×7.8 mm, 5μm)2款色谱柱在纯度测定方法中的分离情况，并对流动相进行了优化；考察了效价测定方法中反应的量效关系和线性范围，探讨了斜率比模型和标准曲线法的效价计算方式。结果:以0.1 mol·L^-1磷酸盐缓冲液(pH 6.7)为流动相，采用Xbridge protein BEH SEC色谱柱进行分离，主峰前后各杂质峰分离度有了较大改善。2种菌种来源的门冬酰胺酶效价反应剂量在2～30 U·mL^-1范围内均呈直线反应，r均大于0.995,标准曲线测定方法更为简单、准确，样品采用高低双剂量可以有效消除实验误差，双剂量测定偏差可小于±2.0%。结论:与绝对法相比，相对法在效价测定的准确度和重现性方面都有较大...