精子优选新方法建立及相关调节机制研究

目的建立一种人精子优选方法并研究相关调节机制。方法设计制作一种新装置,利用孕酮进行条件优化,通过精子浓度检测验证方法可行性,同时检测精子优选前后的形态、DNA片段和凋亡状态以评价优选效果;进一步用特异性抑制剂格尔德霉素和(或)17-AAG研究了与孕酮作用相关的热休克蛋白90(Hsp90)调节精子功能相关分子机制。结果确立了优选人精子方法的实验条件,经所建立方法优选后,形态正常和DNA完整的人精子比例增加,凋亡状态没有显著变化。格尔德霉素抑制孕酮诱发的人精子获能、活力及超激活运动。Hsp90与共伴侣Cdc37存在共定位且存在蛋白相互作用,其磷酸化分别受PKA抑制剂H-89和PKC抑制剂Go6983抑制;17-AAG抑制酪氨酸蛋白激酶Src活性位点Y416的磷酸化。精子存在蛋白棕榈酰化,Hsp90棕榈酰化水平在获能培养后增加。结论成功建立了基于孕酮的精子优选新方法,可提高精子质量;孕酮调节精子功能受Hsp90介导,Hsp90与共伴侣Cdc37发生相互作用、在精子获能期间发生棕榈酰化、其磷酸化受PKA和PKC调节,进而调节Src活性。