| 一种带有组氨酸标签的抗糖尿病疫苗的构建、表达、纯化及鉴定 |
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| 引用本文： | 杨雪,刘晓锐,邢芸,徐茂磊,金亮,刘景晶,吴洁.一种带有组氨酸标签的抗糖尿病疫苗的构建、表达、纯化及鉴定[J].药物生物技术,2013(3):189-193. |
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| 作者姓名： | 杨雪 刘晓锐 邢芸 徐茂磊 金亮 刘景晶 吴洁 |
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| 作者单位： | 中国药科大学 生命科学与技术学院 微基因实验室 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(No.81172973,31270985);中央高校基本科研业务费研究生专项(No.JKY2011076) |
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| 摘 要： | 利用组氨酸标签系统提高抗糖尿病疫苗HSP65-6P277融合蛋白的产量,简化纯化工艺。通过PCR方法,在融合蛋白HSP65-6P277的N端添加6个组氨酸标签后,定向克隆到pET28a原核表达载体中成功构建了组氨酸标签融合表达载体pET28a-HIS-HSP65-6P277。通过乳糖诱导,融合蛋白HIS-HSP65-6P277在大肠杆菌BL21(DE3)宿主中以可溶形式表达,镍柱亲和层析纯化后,经SDS-PAGE和Western blotting鉴定表明表达产物是约70 k具有6个组氨酸标签肽的融合蛋白;分离纯化融合蛋白的时间从原来的15～20 d缩短为2～3 d,产量提高到56 mg/L。组氨酸标签系统可以较好的简化抗糖尿病疫苗HSP65-6P277融合蛋白的纯化工艺,提高产量。
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| 关 键 词： | 疫苗 Ⅰ型糖尿病 大肠杆菌 重组表达 His-Hsp65-6p277融合蛋白 分离纯化 组氨酸标签 |
| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ |
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