手性荧光衍生化反相高效液相法分离DL-异丙肾上腺素

目的探讨R(-)-4-(N,N-Dimethylaminosulfonyl)-7-(3-isothiocyanatopyrrolidino)-2,1,3-benzoxadiazole(DBD-PyNCS)为手性荧光衍生化试剂,建立DL-异丙肾上腺素对映体的柱前衍生反相高效液相色谱法(RP-HPLC)高灵敏分离及分析的最佳方法。方法分别取DBD-PyNCS乙腈溶液(36mmol/L)、异丙肾上腺素对映体水溶液(1mmol/L)、20%吡啶乙腈溶液各10μL混合于聚丙烯管中,用涡旋搅拌器搅拌1min,在金属恒温仪遮光65℃条件下,反应35min。取衍生产物10μL进样于HPLC中。结果生成的非对映体衍生物(λex=460nm,λem=550nm)在流动相为乙腈-水(35∶65,v/v),流速为1.0mL/min,在Diamon-sil^TMC₁₈(150mmx4.6mm,i.d.,5μm)色谱柱上分离成两个完全独立的峰,D-异丙肾上腺素、L-异丙肾上腺素的保留时间分别为26min、31min。异丙肾上腺素对映体在3.23×10^-4mol/L～2.63×10^-3mol/L范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9997),峰面积测定结果的相对标准偏差为1.83%(n=7),最低检测限为2.1×10^-11mol/L(S/N=3)。结论利用柱前衍生反相高效液相色谱法可以使DL-异丙肾上腺素对映体得到快速、高效的分离。