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| 人C型凝集素受体dectin-1单克隆抗体的制备 | |
| 引用本文： | 杨龙,王英,朱乐乐,姜远英,贾鑫明.人C型凝集素受体dectin-1单克隆抗体的制备[J].药学服务与研究,2015,15(2). |
| 作者姓名： | 杨龙 王英 朱乐乐 姜远英 贾鑫明 |
| 作者单位： | 1. 第二军医大学药学院新药研究中心,上海,200433 2. 第二军医大学长海医院皮肤科,上海,200433 3. 同济大学医学院免疫学教研室,上海,200092 |
| 摘 要： | 目的:克隆获得并原核表达人dectin-1基因的胞外段,以其作为抗原,制备人C型凝集素受体dectin-1的单克隆抗体.方法和结果:利用RT-PCR技术从人的外周血中克隆获得人dectin-1基因,克隆到pCDNA 3.0(+)载体中,获得pCDNA3.0(+)-dectin-1质粒.将dectin-1胞外段dectin-1(202 bp-744 bp)]克隆到pET28a(+)载体,构建原核表达质粒pET28a(+)-dectin-1(202 bp-744 bp),转到大肠杆菌E.coli BL21 (DE3)中,IPTG诱导目的片段原核表达,得到高效表达的dectin-1(202 bp-744 bp),镍柱亲和层析纯化后免疫BALB/c小鼠,取抗体滴度高的小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,获得1 5株阳性杂交瘤细胞株,利用有限稀释法进行单克隆杂交瘤细胞株的筛选,获得5株单克隆细胞株.用单克隆细胞株制备小鼠腹水模型,经辛酸-硫酸铵沉淀法纯化获得dectin-1的单克隆抗体.经蛋白质印迹法验证,此单克隆抗体能有效地识别人和小鼠的dectin-1蛋白.结论:成功制备获得dectin-1蛋白的特异、高效的单克隆抗体. |
| 关 键 词： | C型凝集素受体 dectin-1 单克隆抗体 |
Preparation of monoclonal antibody of human C-type lectin receptors dectin-1 |
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| YANG Long,WANG Ying,ZHU LeLe,JIANG YuanYing,JIA XinMing.Preparation of monoclonal antibody of human C-type lectin receptors dectin-1[J].Pharmaceutical Care and Research,2015,15(2). | |
| Authors: | YANG Long WANG Ying ZHU LeLe JIANG YuanYing JIA XinMing |
| Abstract: | |
| Keywords: | C-type lectin receptor dectin-1 monoclonal antibody |