| 不同双荧光素酶方法对检测胃癌相关miRNAs靶向基因TIAM1的影响 |
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| 作者单位： | ;1.中日友好医院病理科;2.北京医院国家老年医学中心国家卫生健康委临床检验中心中国医学科学院老年医学研究院;3.吉林大学第一医院检验科 |
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| 摘 要： | 目的:探讨不同双荧光素酶实验方法对检测胃癌相关miRNAs靶向基因TIAM1的影响。方法:从胃癌细胞系BGC823基因组中提取T-细胞淋巴瘤侵袭转移诱导基因(TIAM1)的3’非编码区(3’-UTR)片段全长,将TIAM1-3’UTR构建在2种不同的荧光素酶基因质粒上,选择8个miRNAs进行双荧光素酶实验研究。结果:miR-10b的抑制物使2种质粒的相对荧光素酶活性均升高;miR-651和miR-653的抑制物使2种质粒的相对荧光素酶活性变化完全相反;miR-10b-5p的抑制物和类似物(mimic)分别使psi-TIAM1-3’UTR的相对荧光素酶活性增高和减弱;而miR-372-3p、miR-373-3p和miR-653-5p的抑制物和类似物处理组荧光素酶活性均升高,miR-335-3p的抑制物和类似物处理组荧光素酶活性均减低。结论:进行双荧光素酶实验时psi-TIAM1-3’UTR这类2种基因位于同一质粒且不以Renilla作为内参的质粒较为合适,并发现miR-10b-5p能够直接靶向作用于TIAM1-3’UTR。
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| 关 键 词： | 双荧光素酶实验 T-细胞淋巴瘤侵袭转移诱导基因 微小RNA |
Detection of gastric cancer related miRNAs targeting TIAM1 gene based on different double luciferase assay methods |
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