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细胞死亡调控基因GRIM19重组腺病毒的构建及在恶性胶质瘤CHG-5细胞中的表达
引用本文:姚声涛,黄轶,曾昭淳,唐文渊.细胞死亡调控基因GRIM19重组腺病毒的构建及在恶性胶质瘤CHG-5细胞中的表达[J].第三军医大学学报,2008,30(23):2194-2197.
作者姓名:姚声涛  黄轶  曾昭淳  唐文渊
作者单位:1. 重庆医科大学附属第一医院神经外科,重庆,400016
2. 重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室,重庆,400016;重庆医科大学附属儿童医院临床分子医学中心,重庆,400014
3. 重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室,重庆,400016
摘    要:目的构建细胞死亡调控基因GRIM19(genes associated with retinoid-IFN-induced mortality 19)重组腺病毒载体,观察GRIM19对病毒包装细胞是否具有细胞毒作用,并验证其对脑胶质瘤CHG-5细胞的感染效率。方法采用PCR方法分别将GRIM19以及EGFP基因亚克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV,在BJ5183(pAdeasy)菌内同源重组,筛选阳性克隆,酶切测序鉴定,线性化后转染293T细胞进行包装、扩增、纯化,PCR检测病毒上清,TCID50法测定病毒滴度并感染CHG-5细胞后Western免疫印迹法验证GRIM19蛋白表达。结果连接重组后经酶切和测序法筛选出pAd-GRIM19;转染293T包装细胞,观察到绿色荧光蛋白(GFP)明显表达,细胞生长状态良好,未见明显细胞毒作用。Ad-GRIM19及Ad-EGFP初纯病毒经氯化铯梯度离心纯化最终获得约5×1010U/ml与8×1010U/ml滴度的重组病毒;将其体外感染胶质瘤CHG-5细胞,均能达到90%左右的感染率,Western免疫印迹法表明Ad-GRIM19感染组GRIM19蛋白表达明显升高。结论成功构建了携带GRIM19基因的重组腺病毒,为体内外进一步研究GRIM19对脑胶质瘤的作用奠定了基础。

关 键 词:GRIM19  腺病毒  胶质瘤细胞  CHG-5

Construction of recombinant GRIM19 gene adenovirus and its expression in glioma cell CHG-5
YAO Sheng-tao,HUANG Yi,ZENG Zhao-chun,TANG Wen-yuan.Construction of recombinant GRIM19 gene adenovirus and its expression in glioma cell CHG-5[J].Acta Academiae Medicinae Militaris Tertiae,2008,30(23):2194-2197.
Authors:YAO Sheng-tao  HUANG Yi  ZENG Zhao-chun  TANG Wen-yuan
Abstract:
Keywords:the genes associated with retinoid-IFN-induced mortality 19  adenovirus  glioma cell line CHG-5  
本文献已被 CNKI 维普 万方数据 等数据库收录!
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