| 人脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶hAPE1融合蛋白的构建、纯化及其功能的初步研究 |
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| 引用本文： | 戴楠,王东,李梦侠,曹晓静,曾林立,廖玲,杨宇馨.人脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶hAPE1融合蛋白的构建、纯化及其功能的初步研究[J].第三军医大学学报,2009,31(12). |
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| 作者姓名： | 戴楠 王东 李梦侠 曹晓静 曾林立 廖玲 杨宇馨 |
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| 作者单位： | 第三军医大学大坪医院野战外科研究所肿瘤中心,重庆,400042 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金面上项目 |
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| 摘 要： | 目的 构建人脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶(hAEP1)原核表达载体,在大肠杆菌中表达并纯化融合蛋白,对其活性进行初步分析.方法 用PCR法扩增hAEP1基因,克隆入pET28a载体中,获得重组质粒pET28a-hAPE1.将重组质粒转化入E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达并鉴定.用His亲和层析技术进行蛋白纯化,得到hAPE1融合蛋白.用Western blot及电泳迁移率变动分析实验分析hAPE1融合蛋白的抗原性及活性.结果 所构建的重组质粒pET28-hAPE1经双酶切及DNA测序鉴定表明构建正确.IPTG诱导表达后,经SDS-PAGE及Western blot鉴定均在预期位置出现阳性条带,His亲和层析纯化后得到hAPE1融合蛋白经SDS-PAGE及Western blot鉴定正确.Western blot及电泳迁移率变动分析实验证明hAPE1融合蛋白具有抗原性、AP修复及氧化还原活性.结论 成功构建了人脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶的原核表达载体pET28a-hAPE1,并在E. coli BL21(DE3)中高效表达和纯化得到有抗原性及活性的hAPE1融合蛋白.
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| 关 键 词： | 人脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶 原核表达 蛋白纯化 结构与功能 |
Construction,purification and functional characterization of hAPE1 fusion protein |
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| DAI Nan,WANG Dong,LI Meng-xia,CAO Xiao-jing,ZENG Lin-li,LIAO Ling,YANG Yu-xin.Construction,purification and functional characterization of hAPE1 fusion protein[J].Acta Academiae Medicinae Militaris Tertiae,2009,31(12). |
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| Authors: | DAI Nan WANG Dong LI Meng-xia CAO Xiao-jing ZENG Lin-li LIAO Ling YANG Yu-xin |
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