人血管内皮生长因子165基因腺病毒载体的构建及其在C17.2神经干细胞的表达 |
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作者姓名: | 沈庆煜 黎祥喷 陶恩祥 肖颂华 王莉梅 邢诒刚 |
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作者单位: | 中山大学附属第二医院神经科,广东,广州,510120 |
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摘 要: | [目的]构建含有人血管内皮生长因子165(VEGF165)基因的重组腺病毒载体并观察其在C17.2神经干细胞的表达,为下一步脑缺血的转基因细胞移植治疗提供基础.[方法]将VEGF165基因克隆至腺病毒穿梭质粒pAdTrackCMV,获得重组质粒pAdTrack VEGF165,经酶切线性化后,与腺病毒骨架质粒pAdEasy共同转染大肠杆菌BJ5183同源重组获得重组腺病毒质粒,将线性化的重组腺病毒质粒转染293细胞包装获得有感染能力但复制缺陷的重组腺病毒pAdCMV VEGF165,转化体外培养的C17.2神经干细胞.通过RT-PCR、原位杂交、免疫组化、Western blot法检测其在C17.2神经干细胞中的表达.[结果]重组腺病毒AdCMV VEGF165在293细胞中包装成功,病毒滴度达2×1011efu/mL.病毒上清液经ELISA检测VEGF165表达的量为(1135±138)ng/L.重组腺病毒转染神经干细胞后有稳定表达.[结论]成功构建pAd VEGF165重组腺病毒,获得了稳定表达VEGF165的神经干细胞克隆,为下一步脑缺血的转基因细胞移植治疗提供了基础.
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关 键 词: | 血管内皮生长因子 腺病毒科 神经干细胞 |
文章编号: | 1672-3554(2005)3S-0152-04 |
修稿时间: | 2004-09-13 |
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