重组天花粉蛋白体外诱导宫颈癌 HeLa 细胞 p27 基因去甲基化的研究

目的 研究重组天花粉蛋白 (recombinant trichosanthin, rTCS) 对宫颈癌 HeLa 细胞中 p27 基因甲基化状态和基因表达的影响。方法 应用不同质量浓度的 rTCS (20、40、80 μg/mL) 处理体外培养的宫颈癌 HeLa 细胞后，MSP 法检测用药前后细胞中 p27 基因的甲基化状态，RealTime PCR 法检测用药前后细胞中 p27 和 DNA 甲基转移酶1 (DNMT1) mRNA 水平的变化，Westernblotting 法检测用药前后细胞中 p27 蛋白表达的变化。结果 HeLa 细胞中 p27 基因为低表达，基因启动子区 CpG 岛呈部分甲基 化状态。40 μg/mL rTCS 处理导致 p27 基因启动子区 CpG 岛去甲基化；在 20、40、80 μg/mL 的 rTCS 作用 48 h 后，p27 基因 mRNA 相对表达水平分别升高 2.22、4.00、6.03 倍，p27 蛋白水平表达也逐渐增加；宫颈癌 HeLa 细胞中 DNMT1 mRNA 高表达，40 μg/mL rTCS 处理 48 h 可至 DNMT1 mRNA 表达水平降低 78%。结论 rTCS 通过抑制 DNMT1，逆转 p27 基因启动子区 CpG 岛的甲基化状态，使宫颈癌 HeLa 细胞中 p27 基因表达活化。rTCS 能逆转宫颈癌 HeLa 细胞 p27 基因甲基化状态，调控 p27 基因和 DNMT1 的表达。

In vitrointroduction of recombinant trichosanthin on demethylation of p27 in HeLa cells