钙敏感受体参与MAPK通路诱导细胞凋亡信号传导通路的机制研究

目的钙敏感受体(calcium-sensing recetor,CaR)具有七个跨膜区的G蛋白耦联受体,它通过激活PLC系统引起肌浆网释放钙从而引起细胞内钙的升高。CaR与心肌细胞凋亡的关系及相关信号传导途径。方法大鼠乳鼠心肌细胞培养复制缺血再灌注损伤,并分为五组,分别:1)对照组;2)模拟缺血/再灌注组;3)GdCl3 NiCl2 CdCl2组;4)SP600125组;5)SB203580组;观察加入CaR激动剂时CaR的表达情况;MTT法和流式细胞仪观察细胞凋亡;Western Blot检测心肌组织,同时还检测了培养心肌细胞中磷酸化JNK和p38的表达。结果心肌缺血/再灌注和加入CaR激动剂时CaR的表达明显高于对照组,细胞内钙升高幅度明显大于对照组。HE染色、TUNEL和电镜观察发现缺血/再灌注和激动剂组损伤明显,并且凋亡细胞广泛存在。同时,细胞浆中cyt c和Caspase3的表达明显增加,而线粒体中的cyt c和胞浆中的Bcl2的表达下降。磷酸化JNK和p38的表达增多,在加入JNK抑制剂SP600125和p38抑制剂SB203580心肌细胞凋亡率明显下降,磷酸化JNK和p38的表达减少。结论CaR参与大鼠心肌缺血/再灌注损伤介导细胞内钙超载。CaR激活后,通过诱发线粒体损伤而引起cytc-Caspase 3途径促进心肌细胞凋亡;同时亦可激活JNK和p38酪氨酸蛋白激酶途径参与细胞凋亡。