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大鼠骨髓间充质干细胞的分离与培养方法优化
引用本文:祝旭龙,颜谭,姚维杰,王永恒,程冲,向俊西,吕毅,高庆东,李建辉,GAO Qingdong,LI Jian-hui.大鼠骨髓间充质干细胞的分离与培养方法优化[J].南方医科大学学报,2014(11):1621-1626,1631.
作者姓名:祝旭龙  颜谭  姚维杰  王永恒  程冲  向俊西  吕毅  高庆东  李建辉  GAO Qingdong  LI Jian-hui
作者单位:1. 陕西省人民医院/西安交通大学第三附属医院肿瘤外科,陕西 西安 710068; 延安大学医学院,陕西 延安716000
2. 陕西省人民医院/西安交通大学第三附属医院肿瘤外科,陕西 西安,710068
3. 西安交通大学第一附属医院肝胆外科,陕西 西安,710061
4. Department of Surgical 0ncology, Shaanxi Provincial People's Hospital/Third Affiliated Hospital of Xi'an Jiaotong University, Xi'an 710068, China
基金项目:国家自然科学基金(81170455);陕西省科技统筹创新工程项目(2011KJCL03-13) Supported by National Natural Science Foundation of China
摘    要:目的:建立一个分离、培养、纯化大鼠的骨髓间充质干细胞的方法。方法使用贴壁法分离大鼠的骨髓间充质干细胞,通过培养初期的频繁换液和传代过程中减少胰蛋白酶的暴露时间,达到骨髓间充质干细胞的纯化。流式细胞仪检测细胞表面标志物,MTT法检测细胞生长状况,暴露于不同的诱导培养基使细胞成骨、成脂,并向肝胆系分化。结果分离所得的细胞阳性表达CD29、CD44、CD90,而对于造血细胞标志物CD45呈阴性。在成骨、成脂培养基的诱导下,细胞ALP、茜素红、油红O染色均呈阳性,并发现传至10代的细胞仍保持分化功能。将骨髓间充质干细胞贯续暴露于不同的细胞因子和激素,得到了表达肝细胞、胆管上皮细胞特异标志的子代细胞。结论通过改良后的方法可以高效、简洁地分离出形态均一的大鼠骨髓间充质干细胞,并能够向多胚层的细胞分化。

关 键 词:骨髓  间充质干细胞  分离与培养  肝细胞  胆管上皮细胞  大鼠

Optimization of the method for isolating and culturing rat mesenchymal stem cells
Abstract:
Keywords:bone marrow  mesenchymal stem cell  isolation and culture  hepatocytes  biliry epithelial cells
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