| 人睾丸新基因SPAG4L的原核表达与纯化 |
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| 引用本文： | 蒋先镇,杨明刚,邢晓为.人睾丸新基因SPAG4L的原核表达与纯化[J].南方医科大学学报,2010,30(9):2047. |
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| 作者姓名： | 蒋先镇 杨明刚 邢晓为 |
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| 作者单位： | 1. 中南大学湘雅三医院,泌尿外科,湖南,长沙,430013
2. 中南大学湘雅三医院,医学实验中心,湖南,长沙,430013 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，中国博士后基金 |
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| 摘 要： | 目的 原核表达人睾丸生精相关基因SPAG4L,并对重组蛋白进行纯化,为下一步研究SPAG4L的生物学功能奠定基础.方法 运用RT-PCR从人睾丸中扩增编码SPAG4L126-379的基因片段,并将PCR产物克隆至pUCm-T载体.用限制性内切酶EcoRⅠ和HindⅢ消化后,将目的 片段克隆至带有6个组氨酸标签的原核表达载体PQE30中.重组质粒PQE-30-SPAG4L经酶切和测序验证后,转化大肠杆菌JM15,IPTG诱导融合蛋白表达.SPAG4L融合蛋白以westernblot进行鉴定,最后用NI-NTA磁性琼脂糖珠进行纯化.结果 成功构建了重组表达质粒PQE-30-SPAG4L,并能够在大肠杆菌JM15中诱导表达,经Westernblot分析证实,IPTG诱导表达的是SPAG4L融合蛋白.建立小规模的SPAG4L融合蛋白表达、纯化系统,获得了带有6个组氨酸标签的纯化的SPAG4L融合蛋白.结论 成功地对人睾丸生精相关基因SPAG4L进行了体外原核表达,获得了纯化的融合蛋白蛋白,为进一步研究该蛋白在精子发生中的生物功能奠定了基础.
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| 关 键 词： | 克隆 原核表达 融合蛋白 |
Prokaryotic expression and purification of SPAG4L, a novel human testis gene |
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| JIANG Xian-zhen,YANG Ming-gang,XING Xiao-wei.Prokaryotic expression and purification of SPAG4L, a novel human testis gene[J].Journal of Southern Medical University,2010,30(9):2047. |
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| Authors: | JIANG Xian-zhen YANG Ming-gang XING Xiao-wei |
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| Institution: | JIANG Xian-zhen1,YANG Ming-gang1,XING Xiao-wei2 1Department of Urology,2The CenterforExperimental Medicine Research,Third Hospital of Central South University,Changsha 410013,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | SPAG4L |
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