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P2X7受体在原代培养星形胶质细胞生长中的作用
引用本文:刘颖,梁华征,孙景军,叶诸榕.P2X7受体在原代培养星形胶质细胞生长中的作用[J].复旦学报(医学版),2007,34(4):491-497.
作者姓名:刘颖  梁华征  孙景军  叶诸榕
作者单位:复旦大学上海医学院病理学系,上海,200032
摘    要:目的探讨ATP是否促进原代培养的星形胶质细胞(astrocytes,As)发生类似反应性星形胶质化的变化以及嘌呤类受体P2X7在该过程中的作用。方法原代As的分离和培养;实时照相观察As形态变化;用Br-dU掺入法及流式细胞观察As增殖变化;用荧光标记实时定量PCR(real-time RT-PCR)检测GFAP mRNA,P2X7mRNA,TGF-β1mRNA表达的变化;用Western blot检测GFAP表达;ELISA检测培养上清中TGF-β1的变化。结果成功分离并培养原代As,免疫荧光鉴定阳性率为99%。不同浓度ATP(50μmol/L,100μmol/L,500μmol/L)作用于As,均可使之表现出类似反应性胶质化的形态改变,表现为胞浆丰富,细胞突起增加且更为明显。ATP100μmol/L作用1d后,As的S期细胞数目明显增加,提示细胞增殖的活跃,5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromodeoxyuridine,5-BrdU)掺入法显示细胞核阳性率明显增加。500μmol/L浓度的ATP能促进As的GFAP mRNA,P2X7mRNA表达。用P2X7特异性的受体激动剂2′-3-′O-(4-benzoylbenzoyl)-adenosine-5′-triphosphate(BzATP)50μmol/L,75μmol/L,100μmol/L作用于原代培养的As,在培养基有Ca2+情况下可明显促进GFAP表达。在培养基有Ca2+的情况下BzATP作用2h及12h时As中TGF-β1mRNA升高。培养上清中TGF-β1蛋白的含量在8h及48h均有升高。TGF-β1中和抗体能部分抑制P2X7引起的As GFAP含量的增加。结论100μmol/L的ATP可以促进As增殖。各种浓度ATP均可促进As形态产生类似胶质化反应的变化。P2X7特异性受体激动剂BzATP可引发胶质化样反应,并且在有Ca2+的情况下促进TGF-β1的转录和释放。TGF-β1参与了P2X7受体诱导的类似反应性星形胶质化过程。

关 键 词:原代培养星形胶质细胞  反应性星形胶质化  P2X7受体  TGF-β1
修稿时间:2007年1月19日

The mechanism of growth enhancement of P2X7 receptor on primary cultured rat cortical astrocyte
LIU Ying,LIANG Hua-zheng,SUN Jin-jun,YE Zhu-rong.The mechanism of growth enhancement of P2X7 receptor on primary cultured rat cortical astrocyte[J].Fudan University Journal of Medical Sciences,2007,34(4):491-497.
Authors:LIU Ying  LIANG Hua-zheng  SUN Jin-jun  YE Zhu-rong
Abstract:
Keywords:ATP
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