雷公藤红素对肝癌细胞株HepG2的影响及作用机制

目的：研究雷公藤红素（Celastrol）对肝癌细胞株HepG2增殖活力的影响。方法将人正常肝细胞LO2及人肝癌细胞株HepG2接种在DEME培养基中，传代后取对数生长期细胞进行实验，用MTT法测定不同浓度雷公藤红素对正常肝细胞LO2及肝癌细胞株HepG2增殖的量效关系（1、2、4、8、16、32μmol／L）和在0.5μg／mL浓度的雷公藤红素作用下的时效关系（1、2、4、8、12、24 h），Hoechst 荧光染色观察凋亡细胞形态变化以及Western blot检测肝癌细胞株HepG2中半胱氨酸蛋白酶（ caspase ）－3、caspase －8、caspase －9与胞内磷脂酰肌醇3激酶（p－PI3K）、t－胞内磷脂酰肌醇3激酶（t－PI3K）、磷酸化蛋白激酶（p－AKT）、t－AKT、细胞外信号调节激酶（p－ERK）、t－ERK的表达情况。结果经MTT法检测，不同浓度雷公藤红素对正常肝细胞的增殖没有明显抑制作用，而对肝癌细胞HepG2的抑制率依次为6.83％、15.11％、18.32％、21.77％、23.77％、25.51％，作用强度随着浓度的升高而增强；在浓度为0.5μg／mL雷公藤红素作用下，不同时间抑制率分别为6.66％、10.63％、13.31％、15.50％、20.54％、32.34％，呈时间依赖性；Hoechst 荧光染色在显微镜下均显现凋亡细胞。 Western blot结果显示， caspase－3、caspase－8、caspase－9、p－PI3K、p－AKT、p－ERK显影，caspase－3、caspase－8、caspase－9表达量增加，而p－PI3K、p－AKT、p－ERK表达量降低。结论雷公藤红素通过诱导HepG2凋亡及细胞自噬作用，发挥增殖活力抑制作用，可能与调控caspase－3、caspase－8、caspase－9、p－PI3K、p－AKT、p－ERK等相关因子的表达情况有关。