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结核杆菌分泌蛋白Ag85A基因的克隆、表达及其诊断价值
引用本文:吴雪琼,张俊仙,王安生,张妍,周文强,郑冬燕,何菊芳,张涛. 结核杆菌分泌蛋白Ag85A基因的克隆、表达及其诊断价值[J]. 广东医学, 2002, 23(12): 1258-1259
作者姓名:吴雪琼  张俊仙  王安生  张妍  周文强  郑冬燕  何菊芳  张涛
作者单位:中国人民解放军第309医院结核病研究中心,北京,100091
基金项目:总后勤部卫生部科学基金资助项目(编号:2002-12)
摘    要:目的:获得重组抗原85A(rAg85A),研究其免疫学特性,评价其在结核病血清学诊断中的价值。方法:应用基因工程技术克隆、表达、纯化Ag85A蛋白,通过Western印迹分析其抗原性。分别以结核分支杆菌纯蛋白衍生物(PPD)或纯化的rAg85A蛋白为抗原,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)及结核病一步检测血清中抗结核抗体。结果:重组质粒pET30a-Ag85A测序表明与报道的序列相同。它在大肠杆菌BL21(DE3)细胞内以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的2%左右,Western印迹分析它与抗结核分支杆菌多克隆抗体具有良好的免疫反应性。纯化的rAg85A样品纯度约85%左右,每100ml培养菌可获得2mg左右的重组蛋白。以33例正常人血清的OD值 2s为正常界限值,一步法的特异性和敏感性分别为87.9%和65.6%;PPD分别为93.9%和62.5%;rAg85A分别为93.9%和15.6%。结论:pET30a-Ag85A大肠杆菌工程菌能以包涵 体形式表达rAg85A蛋白,该蛋白具有较高的抗原特异性,但检测抗结核抗体的灵敏度低。

关 键 词:克隆 诊断 抗原 Ag85A基因 结核分支杆菌 基因表达 结核病 酶联免疫吸附试验
修稿时间:2002-07-15

Cloning, expression and diagnostic value of gene for Ag85A protein of mycobacterium tuberculosis
Abstract:
Keywords:
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