多囊卵巢综合征患者与正常排卵妇女GV期卵母细胞转录组的比较

目的：探讨控制性卵巢刺激（COS）对多囊卵巢综合征（PCOS）患者和正常排卵妇女GV期卵母细胞中差异表达基因和主要信号转导通路的影响，从而筛选出影响PCOS患者卵母细胞发育的关键基因。方法：选择接受GnRH-a长方案将调的控制性超排卵的PCOS患者3例（PCOS组）和同期因男性不孕因素接受长方案将调的正常排卵妇女3人（对照组），通过酶消化法分离颗粒细胞，收集经过卵胞浆内单精子显微注射（ICSI）之后废弃的未成熟卵母细胞。构建cDNA文库，在Illumina MiSeq测序平台进行测序，并通过RT-PCR技术对测序数据进行体外验证（每组3个重复）。结果：获得了510 024 82个序列读取片段（reads），包含8 G碱基序列信息。通过生物信息学软件共找到63个差异表达基因，极显著上调的基因19个，极显著下调基因有44个（Fold Change>4，FDR<0.01）。PCOS组患者血管内皮生长因子（VEGF）和脂肪酸脱氢酶1（FADS1） mRNA表达水平明显高于对照组（P<0.05），Runt相关转录因子2（RUNX2）、趋化因子1（CXCL1）和热体克蛋白27（Hsp27） mRNA表达水平明显低于对照组（P<0.05），与功能验证结果一致。差异基因基于GO功能注释可分为磷酰化、细胞自噬和转录调控等多个分支，利用KEGG数据库作为参考，这些基因主要富集于磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B（PI3K-Akt）、转化生长因子β（TGF-β）、Hippo、p53和过氧化物酶体增殖剂激活受体（PPAR）信号通路中。结论：PCOS患者GV期卵母细胞中差异表达的基因可能影响卵泡发育和卵母细胞成熟，从而导致胚胎质量低下。