| 应用CRISPR/Cas9基因编辑技术建立miRNA-301a敲除小鼠 |
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| 作者姓名： | 刘宣 季青 李文 周利红 王璇 江海丽 陈静 畅立圣 李琦 |
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| 作者单位： | 1. 上海中医药大学附属曙光医院肿瘤科,上海,201203
2. 上海中医药大学附属上海市中医医院肿瘤科,上海,200071 |
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| 基金项目： | 上海市科委科技发展基金实验动物专项基金资助项目(No.13140902500, 14140901402);国家自然科学基金资助项目(No.81273958, 81303102, 81473478, 81303103);上海市优秀学科带头人计划资助项目(No.XBR2011061);上海市教委创新项目(No.12ZZ118, 12YZ058);上海市教育发展基金会晨光计划资助项目(No.13CG47);上海市卫生局科研基金资助项目(No.20114Y001). |
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| 摘 要： | 目的 利用CRISPR/Cas9基因编辑技术建立miRNA敲除小鼠模型.方法 根据miRNA基因序列,设计针对miR-301a的gRNA引物序列(双靶点),PCR扩增获得针对miR-301a的体外转录模板DNA和构建Cas9体外转录模板,然后进行Cas9和gRNA体外转录.利用体外转录的gRNA/Cas9 mRNA对小鼠受精卵显微注射,并利用T7E1酶切和基因测序对miR-301a突变进行检测和鉴定.结果 PCR扩增、凝胶电泳和基因测序鉴定证实,获得序列正确的用于体外转录的模板DNA;体外转录获得gRNA/Cas9 mRNA,顺利完成对小鼠受精卵的显微注射;利用T7E1酶切对miR-301a突变进行检测,发现8只新生小鼠中有7只(87.5％)被鉴定在miR-301a位点携带突变;基因测序结果显示,各小鼠均有不同程度的碱基插入或缺失突变,其中缺失碱基数目最多的4号小鼠产生31个碱基缺失.结论 成功建立miR-301a基因高效敲除小鼠模型.
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| 关 键 词： | CRISPR/Cas9 基因编辑 miR-301a 基因敲除小鼠 |
| 收稿时间： | 2014/12/4 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2/6/2015 12:00:00 AM |
Application of CRISPR/Cas9 gene targeting technology for establishing miRNA-301a knockout mouse model |
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| Authors: | LIU Xuan JI Qing LI Wen ZHOU Li-hong WANG Xuan JIANG Hai-li CHEN Jing CHANG Li-sheng and LI Qi |
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| Institution: | Shuguang Hospital, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | CRISPR/Cas9 gene editing miR-301a knockout mice |
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