| 抗日本脑炎病毒单克隆抗体2F2重链可变区基因的克隆与鉴定 |
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| 引用本文： | 寇甜甜,雷迎峰,丁天兵.抗日本脑炎病毒单克隆抗体2F2重链可变区基因的克隆与鉴定[J].当代医师,2014(5):577-580. |
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| 作者姓名： | 寇甜甜 雷迎峰 丁天兵 |
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| 作者单位： | 第四军医大学基础部微生物学教研室,西安710032 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目（81171557） |
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| 摘 要： | 目的 克隆抗日本脑炎病毒单克隆抗体2F2重链可变区（VH）基因.方法 从分泌抗日本脑炎病毒单克隆抗体2F2的杂交瘤细胞中提取总RNA,通过RT-PCR扩增重链可变区基因.凝胶回收纯化后与pMD-18T载体连接,重组载体转化于宿主菌DH5α,挑取菌落PCR鉴定后测序并进行分析.测序正确的质粒经EcoRI和XhoI酶切、纯化后的产物和原核表达载体pRSET A在SolutionI作用下连接,转化BL21（DE3）对重组质粒进行表达.经Tricine-十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）检测重链可变区表达产物的表达水平,用ELISA检测表达产物能否与日本脑炎病毒结合.结果 确定了2F2VH基因序列,长度为354 bp,编码118个氨基酸,第22位和第96位残基是维持抗体结构的半胱氨酸,含有特异性CDR1、CDR2和CDR3区域,符合鼠源性免疫球蛋白基因的特征.ELISA检测结果显示原核表达的2F2重链可变区产物可与日本脑炎病毒特异性结合.结论 获得了抗日本脑炎病毒单克隆抗体2F2重链可变区基因.
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| 关 键 词： | 脑炎病毒 日本 抗体 单克隆 克隆 分子 |
Cloning and characterization of the heavy chain variable region gene of monoclonal antibody 2F2 against Japanese encephalitis virus |
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| Authors: | Kou Tiantian Lei Yingfeng Ding Tianbing |
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| Institution: | . (Department of Microbiology, School of Basic Medicine, The Fourth Military Medical University, Xi＇an 710032, China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Encephalitis virus Japanese Antibodies monoclonal Cloning molecular |
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