α-半乳糖苷酶A基因敲除猪胎儿成纤维细胞系的建立 |
| |
引用本文: | 冷允俊,刘晓蕊,李琳,王盈,杨海元,戴一凡.α-半乳糖苷酶A基因敲除猪胎儿成纤维细胞系的建立[J].中国医科大学学报,2022(8):688-694. |
| |
作者姓名: | 冷允俊 刘晓蕊 李琳 王盈 杨海元 戴一凡 |
| |
作者单位: | 南京医科大学江苏省异种移植重点实验室 |
| |
基金项目: | 国家自然科学基金(81874144); |
| |
摘 要: | 目的 基于CRISPR/Cas9技术构建α-半乳糖苷酶A (GLA)基因敲除的巴马公猪胎儿成纤维细胞(PFFs),为构建人类Fabry病猪模型提供实验材料。方法 利用生物信息学方法对人/猪GLA基因编码的α-Gal A的相似性进行分析,并鉴定出猪α-Gal A的催化残基位置。通过在线工具在编码催化残基之前的外显子区设计单链向导RNA,构建CRISPR/Cas9打靶载体。将打靶载体与抗性质粒共转染至巴马公猪胎儿PFFs,用G418药物筛选出单克隆细胞,并PCR测序鉴定。结果 人/猪α-Gal A的氨基酸序列一致性为81%,相似性为89%;三维结构的均方根偏差值为0.012。猪α-Gal A的催化残基是第174位和第235位的天冬氨酸。成功构建CRISPR/Cas9打靶载体,并筛选出单克隆细胞,PCR测序鉴定其基因型。结论 用生物信息学方法验证了人/猪α-Gal A具有高度的相似性。利用CRISPR/Cas9技术获得了GLA基因敲除的巴马公猪PFFs细胞系,为构建人类Fabry病猪模型奠定了基础。
|
关 键 词: | Fabry病 α-半乳糖苷酶A基因 α-半乳糖苷酶A CRISPR/Cas9 猪胎儿成纤维细胞 |
|
|