含Ⅲ型纤连蛋白域蛋白5真核表达载体的构建及初步功能研究 |
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引用本文: | 魏飞宇,成燕,李进,肖俊杰,周蕾.含Ⅲ型纤连蛋白域蛋白5真核表达载体的构建及初步功能研究[J].同济大学学报(医学版),2015,36(4):19-24, 37. |
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作者姓名: | 魏飞宇 成燕 李进 肖俊杰 周蕾 |
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作者单位: | 南京医科大学第一附属医院心脏内科,南京 210029,同济大学附属同济医院心身科,上海 200065,上海大学生命科学学院,上海 200444,上海大学生命科学学院,上海 200444,南京医科大学第一附属医院心脏内科,南京 210029 |
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基金项目: | 国家自然基金青年项目(81400885) |
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摘 要: | 目的 构建含小鼠FNDC5基因的绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C3-FNDC5,并初步探索其对C2C12肌细胞的线粒体能量代谢的影响。方法 应用反转录-聚合酶链反应法从小鼠腓肠肌和心脏组织中扩增出两端带有HindⅢ和EcoRⅠ酶切位点的FNDC5编码片段,经回收、纯化酶切后,依次连接到质粒PMD19-T和pEGFP-C3上,获得过表达载体后转染至C2C12肌细胞,48h后以激光共聚焦显微镜拍摄线粒体荧光强度,以荧光定量PCR检测与线粒体能量代谢相关的基因PGC-1β、ATPase6、ND1和ND6的表达情况。结果 PCR及测序结果表明:重组质粒pEGFP-C3含有FNDC5段,方向及大小正确,过表达FNDC5可以增强线粒体荧光强度,并增加线粒体能量代谢相关的基因PGC-1β、ATPase6、ND1和ND6的表达。结论 成功构建了小鼠真核表达载体pEGFP-C3-FNDC5,过表达FNDC5可以增强线粒体能量代谢。
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关 键 词: | FNDC5基因 真核表达载体 质粒构建 线粒体 能量 小鼠 |
收稿时间: | 2015/3/17 0:00:00 |
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