| 猪α干扰素基因的克隆、原核表达及生物学活性鉴定 |
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| 引用本文： | 夏俊保,赵俊,汤仁树,崔寰,陈伟,王明丽.猪α干扰素基因的克隆、原核表达及生物学活性鉴定[J].安徽医科大学学报,2009,44(1). |
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| 作者姓名： | 夏俊保 赵俊 汤仁树 崔寰 陈伟 王明丽 |
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| 作者单位： | 安徽医科大学微生物学教研室,合肥,230032;安徽医科大学微生物学教研室,合肥,230032;安徽医科大学微生物学教研室,合肥,230032;安徽医科大学微生物学教研室,合肥,230032;安徽医科大学微生物学教研室,合肥,230032;安徽医科大学微生物学教研室,合肥,230032 |
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| 基金项目： | 安徽省教育厅自然科学基金重点项目 |
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| 摘 要： | 目的 构建稳定、高效表达的重组猪α干扰紊(rpoIFN-α)大肠杆菌表达菌株,并纯化鉴定该菌株表达的目的 蛋白,进行生物学活性检测.方法 提取猪肝脏细胞基因组DNA,PCR扩增猪α干扰素(poIFN-α)基因,克隆到pMD18-T载体上,测序鉴定后再亚克隆到pGEX-5X-1载体上,转化入E.coli BL21中后得到表达菌株,用IPTG诱导表达,收集的菌体超声破碎后取上清得粗制蛋白,用GST亲和层析法进行纯化,产物用Western blot进行鉴定,并在Hep-2/VSV系统上滴定效价.结果 重组质粒pGEX-5X-1/polFN-α经过EcoR 1和Xho Ⅰ限制性酶切后可见501 bp的目的 片段,提取质粒测序鉴定,结果与GeneBank中的序列一致.转化入E. coli BL21中32℃条件下经IPTG诱导5 h,提取总蛋白,SDS-PAGE检测显示带有GST标记的rpoIFN-α能高效表达,分子量约45 ku,可溶性rpoIFN-α约占菌体蛋白的0.35,Western-blot鉴定显示有特异性条带.效价滴定结果表明该rpoIFN-α具有抗病毒活性,纯化后效价为7.5×106 IU/ml,比活性达到1.1×107IU/mg.结论 成功克隆了polFN-α基因,并可在大肠杆菌中高效表达具有抗病毒活性的rpoIFN-α.
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| 关 键 词： | 干拢索α/遗传学 重组 遗传 猪 大肠杆菌/遗传学 |
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