| 人SAMHD1基因核心启动子区域的初步鉴定和分析 |
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| 引用本文： | 张栋,李苗苗,董阳,刘星赟,应松成,方圣云,沈玉先.人SAMHD1基因核心启动子区域的初步鉴定和分析[J].安徽医科大学学报,2017,52(11):1592-1596. |
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| 作者姓名： | 张栋 李苗苗 董阳 刘星赟 应松成 方圣云 沈玉先 |
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| 作者单位： | 安徽医科大学免疫学教研室,合肥230032;安徽医科大学生物药物研究所,合肥230032;安徽医科大学免疫学教研室,合肥,230032;安徽医科大学生物药物研究所,合肥,230032 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，安徽省自然科学基金，安徽省博士后研究人员科研活动经费资助 |
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| 摘 要： | 目的 鉴定人不育-α-基序结构域和组氨酸/天冬氨酸残基双联体结构域包涵蛋白1 (SAMHD1)基因的核心启动子区域,研究SAMHD1的转录调控机制.方法 从HepG2细胞中提取基因组DNA,PCR扩增SAMHD1基因翻译起始位点上游937、667、553、399 bp片段.将扩增出的4个片段连入pMD19-T载体,双酶切鉴定后将DNA条带切胶回收,再连入pGL3-Basic载体中,双酶切及DNA测序鉴定.将包含有4个片段的荧光素酶表达载体与pRL-TK共转染HepG2细胞,荧光素酶报告基因活性检测并分析4个片段的启动子活性.5'RACE鉴定SAMHD1在HepG2细胞中的转录起始位点.结果 电泳结果显示已经从HepG细胞中提取出基因组DNA.PCR扩增后电泳结果显示已经扩增出937、667、553、399 bp片段.双酶切后电泳结果显示成功将扩增出的4个片段连入pMD19-T载体.双酶切及DNA测序鉴定已成功构建荧光素酶表达载体pGL3-937、pGL3-667、pGL3-553和pGL3-399.荧光素酶报告基因活性检测显示SAMHD1核心启动子区域位于0～-399区域(ATG前一个碱基为-1).5'RACE结果显示SAMHD1在HepG2细胞中转录起始位点位于-101.结论 SAMHD1的核心启动子位于翻译起始位点上游-101～-399区域,为深入研究肝细胞中SAMHD1转录调控机制奠定了基础.
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| 关 键 词： | SAMHD1 核心启动子 转录起始位点 转录调控 |
Identification and analysis of the core promoter region of human SAMHD1 gene |
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