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| 人源DNMT1基因启动子荧光素酶报告基因载体的构建及其活性检测 | |
| 作者单位： | ;1.皖南医学院临床医学院;2.安徽师范大学生命科学学院;3.天津医科大学总医院肺癌研究所;4.皖南医学院检验学院 |
| 摘 要： | 目的:利用PCR扩增人源DNA甲基转移酶1(DNMT1)基因启动子,构建其荧光素酶报告基因载体并对其活性进行检测。方法:运用PCR技术以人非小细胞肺癌细胞A549基因组DNA为模版扩增出目的片段,将PCR产物用KpnⅠ和XhoⅠ双酶切后连接到荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic上,然后进行转化、菌落PCR及测序验证等。将构建成功的pGL3-proDNMT1-luc重组质粒和内参质粒pRL-CMV-luc共转入H1299细胞中检测DNMT1启动子活性。结果:成功扩增出长度为1634 bp的目的片段,并成功构建出DNMT1启动子荧光素酶报告基因载体,启动子具有活性。结论:DNMT1启动子的成功克隆为进一步研究其分子调控机制和生物学意义奠定了基础。 |
| 关 键 词： | DNMT1 启动子 荧光素酶报告基因 |
Construction and determination of the activity of luciferase reporter vector of human DNMT1 gene promoter |
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